[發明專利]酰基化葡甘聚糖納米顆粒的制備及應用

在審

• 申請號: 201710418501.5
• 申請日: 2017-06-06
• 公開（公告）號: CN107007555A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 董磊;王春明;甘璟璟
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A61K9/14
• 分類號: A61K9/14;A61K31/736;A61P29/00;A61P19/02;A61P17/02;A61P1/04;A61P1/00;A61L15/44;A61L15/28
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙)32288
• 代理人: 呂鵬濤

技術領域：

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及酰基化葡甘聚糖納米顆粒的制備及應用。

背景技術：

巨噬細胞(Macrophage)是在各類慢性炎癥疾病的發生發展中起到重要作用的免疫細胞,包括動脈粥樣硬化，哮喘，炎癥性胃腸炎，類風濕性關節炎及組織修復等。活化的巨噬細胞刺激促炎因子的大量分泌，從而促進炎癥反應的發生發展。當機體內組織發生炎癥時，血液中的單核細胞被招募至炎癥部位，并分化成活化的巨噬細胞，浸潤粘膜層，分泌促炎細胞因子，從而導致上皮細胞及腺體凋亡、屏障功能喪失、組織壞死、肉芽腫形成和纖維化。例如炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease)和胃潰瘍(Gastric ulcer)是典型慢性的，易復發的炎癥性疾病，其病因和發病機制比較復雜，診斷和治療也相當棘手，但針對巨噬細胞的治療是當今熱門研究方向之一，通過新型分子治療策略來抑制巨噬細胞的活化狀態，降低炎癥因子的表達水平，從而緩解炎癥性疾病的發展；創傷愈合(wound healing)是一個復雜的生物學過程，創傷后愈合的各個階段均有大量的蛋白分子進行誘導和調控，這些因子在合成和分泌后，通過作用于機體細胞及細胞間質，調控組織愈合的均衡發展。既刺激組織修復，又限制組織的過度增生，以維持愈合的動態平衡。巨噬細胞通過表型轉換及相關細胞因子的表達，參與整個組織修復、再生(tissue repair,regeneration)的過程。

白芨多糖(Bletilla Striata polysaccharide)是一種從傳統中藥白芨提取而得的葡甘聚糖，由4分子甘露糖和1分子葡萄糖組成的中性非離子型線形甘露聚糖，具有抗炎、促凝血、抗病毒、抗腫瘤，抗氧化等生物學活性。白芨多糖是安全高效的醫藥原料，具有優良的理化性質，相當具有發展前景的生物材料。魔芋多糖(Konjac polysaccharide,KGM)，是一種天然的高分子多糖，廣泛應用于包裝、涂料、食品及化妝品等領域。除此之外，KGM還具備促免疫功能、抗癌、改善腸道功能、減肥、降脂、降血糖作用、抗皮膚炎癥因子等生物活性，現已被應用于臨床、醫藥等領域，對KGM的進一步研究和深度開發利用已經引起人們的廣泛關注。

多糖的酰基化是對其羥基進行酰基化修飾，改變其理化性質以便形成一定的形態結構，更好的研究對生命體的活性。通過醋酐引入乙酰基降低了白芨多糖的溶解性，疏水基團的加入使高分子量的多糖自發形成納米顆粒，多糖的這種酰基化方法作為多糖改性的一種方法得到人們的廣泛關注和深入研究，并已在醫藥、食品及化工等領域取得重要進展。目前，有關白芨多糖在生物醫藥上的研究局限于藥物載體、黏附劑及血管栓塞劑。

多糖酰基化的制備方法及弊端

發明內容：

本發明的目的是提供一種酰基化葡甘聚糖納米顆粒。

本發明的另一目的是提供該酰基化葡甘聚糖納米顆粒的制備方法。

本發明的又一目的是提供該酰基化葡甘聚糖納米顆粒的應用。這也是本發明的核心。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種酰基化葡甘聚糖納米顆粒，是對葡甘聚糖進行酰基化得到的粒徑為10nm–100nm的納米顆粒；所述的酰基化為甲酰化、乙酰化或丙酰化。

所述的一種酰基化葡甘聚糖納米顆粒優選為對葡甘聚糖進行乙酰化得到的粒徑為25-35nm的納米顆粒；進一步優選對葡甘聚糖進行乙酰化得到的粒徑為30nm的納米顆粒。發明人在研究過程中發現只有甲酰化、乙酰化或丙酰化的葡甘聚糖能夠形成均一分散的納米顆粒，并且較之單純的葡甘聚糖具備更好的抗炎活性，其中尤其以乙酰化的葡甘聚糖的抗炎活性及促進傷口愈合的活性最佳。

所述的葡甘聚糖進一步優選白芨多糖或魔芋多糖中的任意一種。

所述的乙酰化葡甘聚糖納米顆粒，優選主要通過以下步驟制備得到：

(1)白芨多糖或魔芋多糖加入到吡啶中分散，反應溫度40℃～90℃，攪拌時間15min～1h；白芨多糖或魔芋多糖與吡啶的質量體積比為(15-5)mg:1mL；

(2)加入吡啶和醋酐的混合液混合，混合溫度50～95℃，反應時間4～24h；吡啶與醋酐的體積比1：1～1：30；吡啶和醋酐的混合液加入量與步驟(1)中加入的吡啶等體積；

(3)加入蒸餾水，醋酐和水的摩爾比是1：1～1：3；

(4)向反應液中加入過量的無水乙醇，保持4～8℃沉淀過夜，無水乙醇與步驟(3)反應體系的體積比為4:1～10:1；

(5)濾出沉淀，并用無水乙醇或丙酮清洗；