[發(fā)明專利]一種通過熒光淬滅原理快速檢測糖化血紅蛋白含量的檢測方法

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• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107356568A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郗日沫;肖先耀;關(guān)強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 天津友盼生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及硼酸親和糖化血紅蛋白熒光淬滅的檢測方法，屬于生物化學(xué)定量分析的范疇。

背景技術(shù)

糖化血紅蛋白（HbA1c）是人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物。血糖和血紅蛋白的結(jié)合生成糖化血紅蛋白是不可逆反應(yīng)，并與血糖濃度成正比，且可保持120天左右，所以糖化血紅蛋白檢測通常可以反映患者近8~12周的血糖控制情況。國際糖尿病聯(lián)盟推出的新版亞太糖尿病防治指南，明確規(guī)定了糖化血紅蛋白是國際公認(rèn)的糖尿病監(jiān)控“金標(biāo)準(zhǔn)”。

目前檢測糖化血紅蛋白的方法有20多種，主要的方法有三種：離子交換層析法、親和層析法和免疫法。本檢測方法在親和層析的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，選用硼酸偶聯(lián)曙紅熒光物質(zhì)，硼酸結(jié)合糖化血紅蛋白后引起熒光淬滅，檢測淬滅信號來定量測定糖化血紅蛋白含量，因此叫熒光淬滅法。本方法操作簡單，自動化分析，檢測準(zhǔn)確度高，不易受干擾物質(zhì)影響，而且是POCT（point-of-care testing）的小型精密儀器，便于臨床應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種通過硼酸親和熒光淬滅的原理可進(jìn)行快速檢測糖化血紅蛋白含量的檢測技術(shù)。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

（1）熒光物質(zhì)的選擇，曙紅（又名伊紅）是一種發(fā)熒光的氧雜蒽類弱酸性有機(jī)染料，曙紅熒光素由于具有高的發(fā)射效應(yīng)、高熒光量子產(chǎn)率而被廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。選取曙紅—5-硫脲苯基硼酸三乙基胺鹽作為主要反應(yīng)物質(zhì)。硼酸能夠特異性結(jié)合糖化血紅蛋白，同時偶聯(lián)的熒光發(fā)生淬滅，根據(jù)減少的速率計算糖化血紅蛋白含量。

（2）雙光路系統(tǒng)的選擇：根據(jù)曙紅的激發(fā)光譜圖，選擇510nm作為激發(fā)光。根據(jù)熒光光譜圖，選擇探測器為580nm出射光檢測信號。同時根據(jù)血紅蛋白的吸收光譜圖選擇510nm和570nm為血紅蛋白的檢測光。

（3）檢測方法：使用天津三箭生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的糖化血紅蛋白檢測試劑盒（熒光淬滅法）與天津友盼生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的糖化血紅蛋白分析儀A1C-YouPan構(gòu)成的檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測。將裝有熒光試劑的試劑盒放置于儀器光模塊LED1和LED2光路的交點(diǎn)上（檢測室內(nèi)）。當(dāng)血樣加入熒光試劑中后，熒光物質(zhì)會與血液樣本中的糖化血紅蛋白（HbA1c）結(jié)合，引發(fā)熒光淬滅。LED1燈發(fā)射波長為510nm熒光激發(fā)光，LED2燈發(fā)射波長為570nm透射檢測光。在LED1和LED2正對面分別有一個光電傳感器，光電傳感器檢測透過試劑盒的光能量大小，并將光信號轉(zhuǎn)換成電信號，電信號經(jīng)過FPGA（Field-Programmable Gate Array，現(xiàn)場可編程門陣列）技術(shù)處理后會將數(shù)據(jù)傳給CPU，CPU通過血糖濃度轉(zhuǎn)換算法計算出病人血液樣本中的糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的比值。系統(tǒng)會將測得的數(shù)據(jù)存儲于存儲器中并將數(shù)據(jù)在顯示器上顯示出來。同時客戶可根據(jù)需要將儀器測得的結(jié)果打印出來，當(dāng)病人數(shù)據(jù)太多，存儲空間不夠時，操作人員可將病人數(shù)據(jù)拷貝到電腦上。

檢測單位以%DCCT表示：

%DCCT = 糖化血紅蛋白HbA1c的含量 / 總血紅蛋白× 100%

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

本發(fā)明應(yīng)用熒光淬滅技術(shù)定量測定糖化血紅蛋白的原理，提供了方法原理。方法操作簡單，試劑盒是完全封閉的，不污染環(huán)境，對操作者安全，沒有毒害作用。配合糖化血紅蛋白分析儀配套使用，4分鐘出結(jié)果，實(shí)驗(yàn)操作簡單，減少患者的等待時間，提高了臨床檢測的效率。

附圖說明

圖1熒光淬滅法檢測光路系統(tǒng)。將裝有熒光試劑的試劑盒放置于儀器光模塊LED1和LED2光路的交點(diǎn)上（檢測室內(nèi)）。當(dāng)血樣加入熒光試劑中后，熒光物質(zhì)會與血液樣本中的糖化血紅蛋白（HbA1c）結(jié)合，引發(fā)熒光淬滅。LED1燈發(fā)射波長為510nm熒光激發(fā)光，LED2燈發(fā)射波長為570nm透射檢測光。在LED1和LED2正對面分別有一個光電傳感器，光電傳感器檢測透過試劑盒的光能量大小，并將光信號轉(zhuǎn)換成電信號，電信號經(jīng)過FPGA（Field-Programmable Gate Array，現(xiàn)場可編程門陣列）技術(shù)處理后會將數(shù)據(jù)傳給CPU，CPU通過血糖濃度轉(zhuǎn)換算法計算出病人血液樣本中的糖化血紅蛋白占總血紅蛋白的比值。系統(tǒng)會將測得的數(shù)據(jù)存儲于存儲器中并將數(shù)據(jù)在顯示器上顯示出來。同時客戶可根據(jù)需要將儀器測得的結(jié)果打印出來，當(dāng)病人數(shù)據(jù)太多，存儲空間不夠時，操作人員可將病人數(shù)據(jù)拷貝到電腦上。

圖2儀器正面圖。

圖3檢測倉圖。