[發明專利]利用反相高效液相色譜法測定樺木酮酸?氨基酸衍生物含量的方法

在審

• 申請號: 201710407986.8
• 申請日: 2017-06-02
• 公開（公告）號: CN107024556A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 趙俊宏;李文鋒;樊燕鴿;薛寶玉;瑞金娜.奈杜;化林;張欣;王華棟
• 申請（專利權）人: 河南省科學院化學研究所有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙)41104
• 代理人: 時立新

技術領域

本發明涉及新型具有抗癌活性化合物含量檢測方法，具體涉及樺木酮酸-氨基酸衍生物的反相高效液相色譜法(RP-HPLC)含量測定，屬分析化學領域。

背景技術

樺木酮酸，又名路路通酸，是有C-30骨架的五環三萜烯類化合物，整體保持了羽扇烷的結構，結構式如下所示。樺木酮酸分子式為C₃₀H₄₆O₃，樺木酮酸是一種天然生物活性物質，其在自然界如樺樹皮、楓香樹果序等的含量很少。

樺木酮酸結構式I

據研究表明：樺木酮酸具有清熱解毒、調血脂、提高免疫力、消炎、改善頭發光澤、促使頭發生長、抗炎、抗痢疾、抗病原體等作用，還可以作為前列腺素E-2和一氧化氮的抑制體。更重要的是，樺木酮酸在抗HIV和抗腫瘤等活性方面表現出了比以往的藥物靶向性更強、作用機制不同、免疫抑制作用更低、毒副作用更小的特性。因此，對于樺木酮酸及其衍生物這類新型藥物的研究已經逐步受到了藥物研究者的密切關注。但是樺木酮酸的開發應用和臨床研究受到了很大程度的限制，原因是其水溶性很差，極難溶于水中，以致其在有機體內細胞中的抗癌活性只能得到有限的很少部分的發揮。為此，需要高水溶性的賴氨酸對樺木酮酸進行系列化學改性，使其具有良好的生物利用度、高生物活性，尤其是抗腫瘤活性和良好的水溶性，造福人類。

目前，樺木酮酸-氨基酸衍生物已有相關報道，結構如下式所示。樺木酮酸-氨基酸衍生物的純度直接關系到藥物的應用，為此，對其純度進行檢測，具有重要價值但樺木酮酸-氨基酸衍生物的含量測試方法還沒見相關報道。

樺木酮酸-氨基酸衍生物結構式II。

發明內容

本發明的目的是提供一種線性關系好，測定準確性高、具有良好的重現性和穩定性的樺木酮酸-氨基酸衍生物含量測試方法。

為達上述目的，本發明采用反相高效液相色譜法測定樺木酮酸-氨基酸衍生物的含量。具體技術方案如下：

（1）樺木酮酸-氨基酸衍生物溶液配制：稱取樺木酮酸-氨基酸衍生物，置于容量瓶中，加甲醇或乙腈超聲溶解并定容至刻度線，配置成 500 μg/mL，用有機濾膜過濾以備分析測試用。

(2)取配制的樺木酮酸-氨基酸衍生物溶液再經有機系枕頭濾器過濾后注入樣品瓶中，放入液相色譜儀中，采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定樺木酮酸-氨基酸衍生物的含量，所用的液相色譜柱為C₁₈，以甲醇和質量百分含量0.5%甲酸水溶液為流動相，流動相流速為0.8-1.2 mL/min，優選1.0 mL/min。進樣量為1-20 μL。測定樺木酮酸-氨基酸衍生物的含量范圍為0. 10 μg/mL～100 μg/mL。

優選：所述色譜柱為C₁₈ (4.6×250 mm，5 μm)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

優選：所述流動相中甲醇與質量百分含量0.5%甲酸水溶液體積比為（85-70）：（15-30），進一步優選78：22。

反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定條件優選：柱溫為35 ℃，流速為1. 0 mL/min，進樣體積為5 μL，樣品濃度為500 μg/mL。DAD檢測器，最佳檢測波長為205 nm。

優選如上樺木酮酸-氨基酸衍生物結構式II化合物。

本發明優點：本發明確定了采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定樺木酮酸-氨基酸衍生物含量的最佳條件，經實驗驗證，樺木酮酸-氨基酸衍生物含量測試方法線性關系好（R =1），測定準確性高，相對標準偏差小，僅為 0. 15 %，具有良好的重現性和穩定性，穩定性相對標準偏差為 0. 24 %。

附圖說明

圖1為樺木酮酸-氨基酸衍生物液相色譜圖；

圖2為樺木酮酸-氨基酸衍生物線性關系；

圖3為樺木酮酸-氨基酸衍生物工作曲線。

具體實施方式

為對本發明進行更好地說明，舉實施例如下:

實施例1

色譜條件：

用Agilent 1290 高效液相色譜儀，用C₁₈色譜柱C₁₈ (4.6×250 mm，5 μm)；

柱溫：35 ℃；

檢測器：DAD檢測器，檢測波長205 nm；

流動相溶液：甲醇：質量百分含量0.5%甲酸水溶液= 78：22；