[發明專利]一種羊肚菌菌株老化的鑒定方法

在審

• 申請號: 201710407468.6
• 申請日: 2017-06-02
• 公開（公告）號: CN107177663A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 馬曉龍;蔡英麗;劉偉;何培新
• 申請（專利權）人: 武漢市農業科學技術研究院蔬菜科學研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12R1/645
• 代理公司: 蘇州睿昊知識產權代理事務所(普通合伙)32277
• 代理人: 伍見

技術領域

本發明涉及食用菌領域，特別涉及一種羊肚菌菌株老化的鑒定方法，本發明提供了一種簡單有效的判斷菌株老化的檢測方法。

背景技術

羊肚菌是一種名貴的食用菌，除具有味道鮮美，還具有抗腫瘤、抗癌、提高免疫力等功效，深受國內外廣大消費者青睞。羊肚菌的人工栽培因此成為全世界蘑菇愛好者熱衷追尋的工作。近年來，我國的菇民朋友，在其不懈的努力下，終于實現了羊肚菌的大面積人工栽培。截止2016年春季，我國的羊肚菌種植面積已達到24000畝，是2015年總面積的3倍，增速迅猛。然而，在羊肚菌產業迅猛發展的同時，也逐漸暴露出羊肚菌遺傳基礎薄弱對產業發展帶來的影響，特別是菌種質量問題，每年因此至少造成50%的種植戶遭受重大經濟損失。這其中，最重要的的一點就是羊肚菌菌株的老化，老化的菌株吃料能力變差、營養轉化減弱，出菇差或不出菇。

菌株老化是一種伴隨著自噬、凋亡的自然生理現象，任何生物均發生著不可逆的老化現象，然而目前還未有一種針對羊肚菌菌株老化的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種簡單有效快捷直觀的方法檢測羊肚菌菌株的老化程度，通過該檢測方法能夠準確判斷菌株的老化狀態，從而為后續的菌株篩選、復壯、培養等提供有效參考，為羊肚菌的栽培產業帶來巨大的效益。

本發明的技術方案為：

一種羊肚菌菌株老化的檢測方法，包括以下步驟：

1）菌株活化：將待測菌株活化培養，待用；

2)平皿制備：平皿倒入固體培養基，培養基冷卻凝固后，鋪一層無菌的玻璃紙；

3)接種：在玻璃紙的一側距離平皿遠緣一定距離，接種活化的菌種塊；

4)培養和觀察：培養，避免菌絲前端長到平皿的邊緣；培養2.5~3d的菌落用于記錄菌絲生長速度以及顯微觀察；培養兩周的平皿用于觀察記錄菌落形態；

5)制片：將玻璃紙揭開，剪取附帶有玻璃紙的菌落前端的區域，進行顯微觀察；

6)觀察：觀察菌落菌絲尖端的形態；

7)測量：測量菌絲的分支夾角；

8) 結果分析：根據觀察和測量結果進行菌絲生長階段分析。

通過本判斷標準能有效的在羊肚菌栽培前對菌種質量的好壞進行檢測，以到達避免在栽培生產過程中食用菌劣質菌種，為生產帶來危害，目前在羊肚菌栽培領域還未有相關報道。

附圖說明

圖1羊肚菌老化過程的菌落形態特征。

具體實施方式

實施例 1

一種羊肚菌菌株老化的檢測方法，具體為：

1）菌株活化：將待測菌株接入新鮮的滅過菌的CYM培養基，培養基組成為：葡萄糖 20g，蛋白胨 2g，酵母粉2 g，磷酸二氫鉀 0.46 g，磷酸氫二鉀 1 g，硫酸鎂 0.5 g，瓊脂粉 20 g，水1000 mL，pH自然，在試管中進行活化，培養溫度為23 ~ 25℃，培養5~7d待菌絲長滿試管后，作為后續檢測的菌種使用；

2）平皿制備：取直徑9 cm的平皿，滅菌后使用，無菌條件下，在平皿中傾倒12 ~ 15 mL CYM固體培養基，待培養基冷卻凝固后，鋪一層無菌的玻璃紙，玻璃紙呈圓形，直徑略小于平皿直徑；

3）接種：在玻璃紙的一側距離平皿遠緣0.5 ~ 1 cm距離，接種直徑約0.5cm的活化好的菌種塊；

4）培養和觀察：將平皿置于23℃恒溫培養箱內避光培養，培養時間控制在2.5 ~ 3 d內或14 d，避免菌絲前端長到平皿的邊緣；培養2.5~3d的菌落用于記錄菌絲生長速度以及進行顯微觀察；培養兩周的平皿用于觀察記錄菌落形態，包括菌落的顏色；

5）制片：用鑷子小心的將玻璃紙揭開，用剪刀小心的剪取附帶有玻璃紙的菌落前端的區域，置于滴加有10% ~ 20%甘油的載玻片上，再在玻璃紙上的菌絲上滴加一滴10% ~ 20%甘油水溶液，蓋上蓋玻片，進行顯微觀察；

6）觀察：先用4×鏡頭粗調對焦，之后用10×、20×、40×鏡頭觀察菌落菌絲尖端的形態，并拍照記錄；

7）測量： 根據拍照結果，通過軟件自帶的測量軟件或測角器進行菌絲分支夾角的測量，測量數量不少于30個，求均值。

8）菌落形態分析

健壯菌絲階段：菌落絨毛輻射狀，菌絲粗壯，生長迅速（平均長速達0.35 ~ 0.5 mm/h），邊緣整齊，7 ~ 10 d后產生色素，不同菌株產色素情況不同，導致每個菌株或品種之間有較大的差異。

前老化階段：菌落絨毛輻射狀，菌絲較粗壯，生長速度與前一階段相似，邊緣較整齊，產生色素比前一階段提前3 ~ 5 d。