[發(fā)明專利]肺腺癌相關(guān)的miRNA、組合物及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710405001.8
• 申請(qǐng)日: 2017-06-01
• 公開（公告）號(hào): CN107058579A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任靜;宋宏濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京泱深生物信息技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;A61K45/00;A61P35/00
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的涉及肺腺癌相關(guān)的miRNA、組合物及其應(yīng)用，更具體的涉及miR-6087、miR-7976、miR-7705、miR-6744-5p及其組合物在制備肺腺癌診斷制劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肺癌是死亡率較高的惡性腫瘤之一，主要包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，臨床發(fā)病中以非小細(xì)胞肺癌居多，約占80％，非小細(xì)胞肺癌進(jìn)一步可以細(xì)分為腺癌和鱗癌兩大類型。近年來(lái)隨著精準(zhǔn)醫(yī)療的不斷發(fā)展，肺癌的個(gè)體化治療要求對(duì)肺癌進(jìn)行分子水平的精準(zhǔn)分型，雖然已經(jīng)有很多報(bào)道披露部分肺癌的診斷分子標(biāo)志物，但是仍不能滿足需求，需要更多的分子標(biāo)志物助力肺癌的分子分型、靶向治療以及預(yù)后判斷。

miRNA是一類長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸的非編碼內(nèi)源性小RNA，具有多種生物學(xué)功能，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、生理功能尤其在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展等過(guò)程產(chǎn)生重大影響，與mRNA相比，miRNA在體外更穩(wěn)定，在體內(nèi)代謝周期更長(zhǎng)，因而更適合作為腫瘤分子標(biāo)記物。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)miRNA和肺癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，例如 Yanaihara N等研究表明肺癌患者有約有66％的人的miR-21表達(dá)水平至少有2倍以上的上調(diào)，Weiss等研究發(fā)現(xiàn)miRNA-128b缺失的肺癌細(xì)胞對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼十分敏感。

本發(fā)明對(duì)4對(duì)癌組織及癌旁組織的樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，并運(yùn)用生物信息學(xué)方法進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了幾個(gè)之前從未被報(bào)道過(guò)的與肺腺癌相關(guān)的分子標(biāo)志物，其中，miR-6087、miR-7976在癌組織中表達(dá)低于癌旁組織，miR-7705、miR-6744-5p 在癌組織中的表達(dá)量高于癌旁組織，進(jìn)一步，熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了高通量測(cè)序的分析，表明miR-6087、miR-7976、miR-7705、miR-6744-5p很有可能成為新的肺腺癌診斷標(biāo)志物，本發(fā)明為臨床肺腺癌的精準(zhǔn)診斷提供了潛在的分子標(biāo)志物，具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種肺腺癌診斷試劑，所述肺腺癌診斷試劑能夠檢測(cè)肺腺癌樣本中miRNA和/或其前體的表達(dá)情況，或者miRNA調(diào)控的靶基因的表達(dá)，檢測(cè)所述miRNA選自下列中的一種或幾種：miR-6087、miR-7976、miR-7705、 miR-6744-5p。

優(yōu)選的，所述miRNA為miR-7705或miR-6744-5p或二者的組合。

優(yōu)選的，所述miRNA為miR-7705、miR-6744-5p和miR-6087的組合。

所述miR-6087序列見序列表SEQ ID NO 1，其前體mir-6087序列見序列表 SEQ ID NO 2；所述miR-7976序列見序列表SEQ ID NO 3，其前體mir-7976序列見序列表SEQ ID NO 4；所述miR-7705序列見序列表SEQ ID NO 5，其前體 mir-7705序列見序列表SEQ ID NO 6；所述miR-6744-5p序列見序列表SEQ ID NO 7，其前體miR-6744-5p序列見序列表SEQ ID NO 8。

所述的樣本為腫瘤組織或外周血。

進(jìn)一步，肺腺癌診斷試劑基于高通量測(cè)序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探針雜交方法檢測(cè)肺腺癌樣本中miRNA和/或其前體的轉(zhuǎn)錄或基于免疫方法檢測(cè)肺腺癌樣本中其成熟miRNA調(diào)控的靶基因的表達(dá)情況。

優(yōu)選采用northern雜交方法、miRNA表達(dá)譜芯片、核酶保護(hù)分析技術(shù)、RAKE 法、原位雜交、基于微球的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺腺癌樣本中miRNA和/或其前體的轉(zhuǎn)錄。

優(yōu)選的，所述的用于定量PCR方法包括特異性擴(kuò)增miRNA和/或其前體的引物；所述的基于探針雜交方法包括與miRNA和/或其前體的核酸序列雜交的探針。

進(jìn)一步，擴(kuò)增miR-6087的引物為序列SEQ ID NO 9；擴(kuò)增miR-7976的引物為序列SEQ ID NO 10；擴(kuò)增miR-7705的引物為序列SEQ ID NO 11；擴(kuò)增 miR-6744-5p的引物為序列SEQ ID NO 12。

本發(fā)明的目的還在于提供上述miRNA和/或其前體在制備肺腺癌診斷工具中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的在于提供一種治療肺腺癌藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含：

(a)化合物或組合物，所述化合物下調(diào)miR-7705或miR-6744-5p的轉(zhuǎn)錄和 /或抑制miR-7705或miR-6744-5p成熟miRNA的活性；

(b)藥劑學(xué)上能接受的載體。