[發(fā)明專利]一種造血干細胞培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710400532.8
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107099504A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設計）人: 羅天恩
• 申請（專利權）人: 東莞市保萊生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 東莞市華南專利商標事務所有限公司44215
• 代理人: 趙超群

1.一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：包括基礎培養(yǎng)基和添加于基礎培養(yǎng)基中的添加劑，按終濃度計，所述添加劑包括以下含量的組分：FBS 100-200mg/mL、亞硒酸鈉0.02-0.03μmol/mL、卡介菌多糖核酸5-10mg/mL、千金藤素50-100μmol/mL、海藻糖50-100ng/mL、維生素 C 40-80ng/mL、第一細胞因子緩釋微囊1.5-2.5mg / mL、第二細胞因子緩釋微囊25-50mg/mL。

2.根據權利要求1所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述第一細胞因子緩釋微囊的制備方法包括以下步驟：

A、將IL-3、IL-6、GM-CSF、聚乙二醇加入預先添加有甘露醇和硫酸鋅的水溶液中，攪拌均勻后，得到混合物A，所述混合物A中IL-3、IL-6、GM-CSF的濃度均為1-2wt％，聚乙二醇的濃度為6-10 wt％；

B、將聚羥基乙酸- 聚乳酸- 聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，攪拌均勻后，得到混合物B， 所述混合物B中聚羥基乙酸- 聚乳酸- 聚乙二醇的濃度為12-18wt％；

C、將混合物A 加入到混合物B 中，攪拌均勻后，得到混合物C，所述混合物A和混合物B的體積比為1:1-2；

D、將聚乙烯醇、殼聚糖和氯化鈉加入水中，攪拌均勻后，得到混合物D；所述混合物D中聚乙烯醇的濃度為1-2 wt %，殼聚糖的濃度為0.5-1 wt %，氯化鈉的濃度為1-2 wt %；

E、將混合物C加入混合物D中，攪拌進行溶劑揮發(fā)，經洗滌、離心分離、真空冷凍干燥，制得第一細胞因子緩釋微囊。

3.根據權利要求2所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述第一細胞因子緩釋微囊的粒徑為50-90μm。

4.根據權利要求3所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述聚乙烯醇由質量比為1:0.5-2的無規(guī)聚乙烯醇和間規(guī)聚乙烯組成。

5.根據權利要求5所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述無規(guī)聚乙烯醇的聚合度為600-1000，所述間規(guī)聚乙烯的聚合度為1800-2500。

6.根據權利要求2所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述混合物A中，所述甘露醇的濃度為2-4 wt％，碳酸鋅的濃度為1-3 wt％。

7.根據權利要求1所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述第二細胞因子緩釋微囊的制備方法包括以下步驟：

S1、將干細胞因子、FMS樣酪氨酸激酶-3配體、聚乙二醇加入預先添加有葡聚糖和季戊四醇鋅鹽的水溶液，攪拌均勻后，得到混合物Ⅰ，所述混合物A中干細胞因子的濃度為2-4wt％，F(xiàn)MS樣酪氨酸激酶-3配體的濃度為2-4wt％、聚乙二醇的濃度為4-8wt％；

S2、將聚乳酸- 聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，攪拌均勻后，得到混合物Ⅱ， 所述混合物Ⅱ中聚乳酸-聚乙二醇的濃度為13-20wt％；

S3、將混合物Ⅰ加入到混合物Ⅱ 中，攪拌均勻后，得到混合物Ⅲ ，所述混合物Ⅰ和混合物Ⅱ的體積比為1:1-2；

S4、將聚乙烯醇、殼聚糖和海藻酸鈉加入水中，攪拌均勻后，得到混合物Ⅳ；所述混合物Ⅳ中聚乙烯醇的濃度為1-2 wt %，殼聚糖的濃度為0.5-1 wt %，海藻酸鈉的濃度為2-4 wt %；

S5、將混合物Ⅲ加入混合物Ⅳ中，攪拌進行溶劑揮發(fā)，經洗滌、離心分離、真空冷凍干燥，制得第二細胞因子緩釋微囊。

8.根據權利要求7所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述第二細胞因子緩釋微囊的粒徑為60-100μm。

9.根據權利要求7所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：優(yōu)選地，所述混合物Ⅰ中，所述葡聚糖的濃度為4-6 wt％，季戊四醇鋅鹽的濃度為2-4 wt％。

10.根據權利要求1所述的一種造血干細胞培養(yǎng)基，其特征在于：所述基礎培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基。