[發明專利]一種激肽釋放酶7在血液中的含量檢測方法及其作為診斷胰腺癌的血清標志物上的應用在審
| 申請號： | 201710374234.6 | 申請日： | 2017-05-24 |
| 公開（公告）號： | CN108931651A | 公開（公告）日： | 2018-12-04 |
| 發明（設計）人： | 鄭軍;譚瀟;劉森;李林;張丁 | 申請（專利權）人： | 宜昌市中心人民醫院 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/574 |
| 代理公司： | 宜昌市三峽專利事務所 42103 | 代理人： | 蔣悅 |
| 地址： | 443000 湖北*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 激肽釋放酶 含量檢測 血清 血液 孵育 冰箱 待測血清樣品 血清標志物 診斷胰腺癌 標準曲線 取上清液 血液樣品 液體去除 測量光 酶聯板 吸水紙 液孵育 終止液 檢測 稀釋 分裝 混勻 平鋪 去除 洗孔 搖床 桌面 保存 轉換 分配 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種激肽釋放酶7在血液中的含量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1) 收集胰腺癌患者血清，于4℃冰箱靜置10-15小時后離心取上清液保存于-80℃冰箱，實驗前一天所有血清樣品用1×PBS液按1：5比例進行稀釋分裝待實驗檢測；
(2) 分配96孔酶聯板，分別向每個酶聯孔內加入待測血清；
(3) 向每個孔內加入KLK7抗體于室溫下置于搖床上輕搖孵育，去除孔內的液體，加入1×wash buffer洗孔，每次加入washbuffer后放置搖床；
(4) 將吸水紙平鋪于桌面，輕拍酶聯板使孔內液體去除干凈；
(5) 加入HRP于每孔內，于室溫下置于搖床上輕搖孵育；
(6) 重復步驟4和5的步驟1次；
(7) 向每孔內加入TMB液置于搖床上于室溫下孵育；
(8) 向每孔內加入 stop solution 終止液終止反應；
(9) 加入終止液stop solution終止液后輕搖混勻，確保藍色全部變為黃色；
(10) 用450nm波長酶標儀測量各孔的光密度；
(11) 根據標準曲線將光密度（OD值）轉換為KLK7在血清中的含量值，即可完成激肽釋放酶7在血液中的含量檢測。
2.權利要求1所述的激肽釋放酶7在作為診斷或輔助診斷胰腺癌過程中的血清標志物上應用。
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