[發(fā)明專利]一種桑葉免疫活性肽及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710370646.2
• 申請(qǐng)日: 2017-05-23
• 公開（公告）號(hào): CN107119097B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳暉;孫崇臻;賴富饒;武文佳;閔甜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

本發(fā)明屬于桑葉綜合利用技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種桑葉免疫活性肽及其制備方法。該方法為：以桑葉為原料，通過水提鹽沉或堿提酸沉制備桑葉蛋白，再通過中性蛋白酶、堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶6種酶單獨(dú)酶解或者復(fù)合酶解桑葉蛋白制備桑葉免疫活性肽粗品，并采用陰離子柱層析、Sephadex G50、G?25或G?15凝膠柱層析及半制備RP?HPLC對(duì)其進(jìn)行分離純化，得到活性好，純度高的免疫肽。此類免疫肽能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌NO，白細(xì)胞介素IL?6，腫瘤壞死因子TNF?α，增強(qiáng)了機(jī)體對(duì)病原體入侵的抵抗能力。與此時(shí)同，此免疫活性肽可以增強(qiáng)RAW264.7胞飲中性紅的能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種桑葉活性肽，特別是涉及一種桑葉免疫活性肽及其制備方法。

背景技術(shù)

免疫調(diào)節(jié)是指免疫系統(tǒng)中的免疫細(xì)胞與免疫分子之間、以及免疫系統(tǒng)與其他系統(tǒng)之間相互作用，使機(jī)體的免疫應(yīng)答處于最合適的水平，從而維持生物體內(nèi)生理動(dòng)態(tài)平衡。一旦免疫調(diào)節(jié)失衡，就會(huì)引發(fā)病原微生物感染、免疫缺陷病、腫瘤及超敏反應(yīng)等不良癥狀。因此尋找具有免疫活性的免疫分子顯得尤為重要。近期研究認(rèn)為，通過諸如免疫肽、免疫多糖等天然活性物質(zhì)來提高機(jī)體免疫調(diào)節(jié)活性是最有希望替代抗生素治療的方法。免疫活性肽是指一類能夠通過增強(qiáng)機(jī)體免疫力，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力從而提高機(jī)體抵御外來病原體感染能力的免疫功能肽。免疫活性肽作為小分子物質(zhì)，能夠完整的被腸道吸收或者在腸道與受體結(jié)合來發(fā)揮免疫作用，具有活性強(qiáng)、易吸收、穩(wěn)定性強(qiáng)等獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。目前免疫肽主要來源于動(dòng)物、植物、微生物。其中植物蛋白免疫肽因具有來源廣、成本低、活性高等特點(diǎn)而成為研究熱點(diǎn)。目前制備的植物源免疫肽主要有大米肽、米糠肽、綠豆肽等，而葉蛋白免疫肽的研究較少。

桑樹屬桑科桑屬植物，在我國栽培歷史悠久。桑葉是桑樹的葉子，國家衛(wèi)生部將其列為藥食兩用植物。桑葉中含有豐富的蛋白質(zhì)、生物堿、多糖、黃酮、酚酸等物質(zhì)，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。傳統(tǒng)蠶桑產(chǎn)業(yè)中桑葉主要用作蠶飼料，易出現(xiàn)過剩、浪費(fèi)等現(xiàn)象，為了實(shí)現(xiàn)資源的最優(yōu)利用，目前對(duì)桑葉中的多種成分，如多糖、酚酸、黃酮、生物堿等進(jìn)行了提取并進(jìn)行生理活性的分析。如中國專利CN 102370707 A用乙醇溶液制備桑葉、桑枝提取物，經(jīng)大孔樹脂多次洗脫分離，得到主要成分為DNJ、多糖及黃酮的桑葉/桑枝提取物，并將其用于美白及降血糖研究；中國專利CN 102771862 A用50%~70%的酸性乙醇溶液制備了具抑菌活性的桑葉酚酸提取物；中國專利CN 104274534 A用超臨界萃取技術(shù)制備了全成分桑葉提取物，對(duì)其多糖含量進(jìn)行了分析。目前的專利及研究主要集中在桑葉中酚類、DNJ的提取及其在降血糖、美白等藥理活性中的應(yīng)用，提取溶劑多為有機(jī)溶劑，產(chǎn)物溶解性較低。因此，需要對(duì)桑葉中更多的化學(xué)成分及生理活性進(jìn)行研究，以期進(jìn)一步提高桑葉的綜合利用價(jià)值。

研究表明，桑葉中蛋白質(zhì)含量為干基重量的15%~30%，是蛋白含量較高的植物。其氨基酸組成與脫脂大豆粉大體一致，可以用作動(dòng)物飼料添加劑或食品添加劑。目前有少數(shù)文獻(xiàn)及專利對(duì)桑葉蛋白及桑葉肽的提取優(yōu)化進(jìn)行了分析，而對(duì)于桑葉免疫活性肽的制備尚無研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決上述現(xiàn)有桑葉活性成分及免疫肽研究存在的不足之處，提供了一種經(jīng)濟(jì)高效的桑葉免疫活性肽及其制備方法，所得桑葉肽具有純度高、免疫活性高的特點(diǎn)。

本發(fā)明的目的通過如下方法實(shí)現(xiàn)：

一種桑葉免疫活性肽的制備方法，用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶6種蛋白酶單獨(dú)酶解或者復(fù)合酶解桑葉蛋白，并用DEAESepharose Fast Flow 陰離子柱層析、Sephadex G-50、G-25或G-15凝膠柱層析及RP-HPLC對(duì)其進(jìn)行分離純化制備，得到桑葉免疫活性肽；

包括以下步驟：