[發明專利]一種利用雞胚血管系統檢測和評價個人護理產品和原料光毒性的方法

在審

• 申請號: 201710364893.1
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107418997A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 程樹軍;秦瑤
• 申請（專利權）人: 程樹軍;廣州市華代生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司44104
• 代理人: 周克佑

技術領域

本發明屬于藥品、化學品或化妝品光毒性技術領域，具體涉及一種利用雞胚 血管系統檢測和評價個人護理產品和原料光毒性的方法。

背景技術

隨著全球工業化的快速發展，大量新合成化學品和進入生活和環境中。另一 方面，隨著生活水平的提高，個人護理和家居清潔用品的市場也不斷增長，細分 市場包括護膚品、護發產品、洗滌產品、空氣清新劑和物體表面清潔劑等。消費 者普遍關心這些產品的安全性，刺激性、致敏性，還包括使用產品后暴露于陽光 下產生的刺激性，即產品的光毒性問題。因此，個人護理和清潔產品的監管要求 必須對產品的健康危害進行檢測。同時，在這些產品的研發過程中，光毒性的檢 測和評估也貫穿其中。例如對于候選原料(如表面活性劑、植物提取物、合成化 學品)和配方，通常需要反復測試其光刺激性，并希望能夠精確定量不同配方或 產品的刺激程度。此外，對于大量未知毒性特征的化學品，也需要準確了解包括 光毒性在內的毒性特點，以用于危險化學品的分類和標識。

化學品、個人護理品或皮膚接觸物質引起的光毒性，主要包括兩類效應，分 別是光刺激性反應和光變應性反應。這兩種不良反應的共同特點是都要在光照的 條件下才可能發生。光變應性是一種與免疫系統有關的變態反應，其臨床表現與 變應性接觸性皮炎相似。而光刺激性反應，也就是我們通常所說的光毒性是指皮 膚接觸光毒性物質后，暴露于光照一段時間后出現紅斑、水腫，繼之色素沉著和 脫屑等臨床表現，與免疫系統無關。由于衛生清潔、個人護理等產品使用頻率的 增加，上述與光刺激相關的不良反應的發生越來越普遍。另一方面，消費者對于 產品安全性的要求也越來越高，因此有必要在現有的檢測方法的基礎上，建立一 些更快速和更敏感的檢測和評估方法。

現有的外源物質光毒性的方法可分為化學法、動物模型、細胞法和人體試驗 四類。

組氨酸光氧化試驗是通過化學方式檢測物質光毒性的方法。將受試物和組氨 酸共同溶解到溶劑中，檢測混合物暴露于光照后溶液中剩余的組氨酸的量，計算 出受試物吸收組氨酸的量來判斷外源化學物質的光毒性。除此之外，光敏性酵母 生長抑制試驗、淋巴細胞有絲分裂抑制試驗和光動力學DNA斷裂活性試驗等方 法也可以檢測物質的光毒性。雖然化學方法操作簡單，但是反應體系比較單一。 傳統的動物模型皮膚光毒性試驗是將一定量的受試物涂抹在實驗動物(通常為大 鼠)背部去毛的皮膚上，經一定時間間隔后暴露于UVA光線下，觀察受試動物 皮膚反應并確定該受試物是否有光毒性。采用動物作為試驗對象檢測消費品的安 全性，其缺點是成本高、周期長，很少使用現代生物科技發展的成果，還給動物 帶來了極大痛苦，存在道德和倫理上的問題。除此之外，動物實驗環境條件苛刻 (動物需要飼養在恒溫恒濕的室內環境)、動物質量要求嚴格(要求符合質量等 級的要求)、檢測門檻高(檢測機構需要取得實驗動物使用許可證)，又與人的實 際使用情況相差太遠，而且由于動物和人之間存在種屬差異，使用動物皮膚評價 人體皮膚的安全風險使結果的可信度降低。

隨著大量新的物質用于藥品和化妝品，我們需要更多的方法來評價這些物質 的安全性。在生命和醫學研究中的3R原則(減少、優化和代替動物實驗)的影 響下，以及在現代生物科技成果的推動下。經過30多年的發展，大量非動物替 代方法應用于健康危害的檢測和安全評估中，有的方法已被世界經濟合作的發展 組織(OECD)、歐洲替代方法驗證中心(ECVAM)和美國替代方法部門間協調 驗證中心(ICCVAM)等機構認可并定為檢測指南。

目前的體外檢測化學物質光毒性的方法主要是OECD指南432，即化學品體 外3T3成纖維細胞中性紅攝取光毒性試驗，該方法以BALB/c小鼠3T3成纖維 細胞株為模型，將細胞株與化學物質共培養并給予不引起細胞毒性的UVA照射， 加入中性紅以后用酶標儀檢測OD值，計算出光照下受試物的IC50和無光照下 受試物的IC50，最后光刺激因子(PIF)和平均光效應(MPE)來判斷受試物的 光毒性。另外一種檢測物質光毒性的細胞方法是光溶血反應法，該方法以紅細胞 為測試模型，把化學物質與紅細胞混合后用UVA照射，通過觀察受試物對紅細 胞膜的損害，計算溶血率來判斷物質的光毒性程度。單層細胞模型的優點是可以 實現高通量檢測，但是不適用于難溶解、有顏色的化學物，也不適用于劑型和成 份復雜的提取物、配方和成品的測試。

人體志愿者試驗是評價產品安全性的最直接的方法。例如人體光斑貼試驗是 將受試物直接貼在人體皮膚表面，然后用一定波長和劑量的紫外線照射一段時 間，檢測使皮膚出現發紅、水中或丘疹等刺激性反應的劑量，判斷該受試物是否 有光毒性。