[發明專利]在植物高表達目標蛋白的方法及表達植物體的醫療用蛋白質的口服給藥用組合物的制備方法

有效

• 申請號: 201710359603.4
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN107384948B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 黃仁煥;姜享注;孫恩珠;李勇直;劉妍珠;金載允;貝里格倫·珀奧樂福
• 申請（專利權）人: 浦項工科大學校產學協力團
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20;C07K19/00;A61K47/42
• 代理公司: 北京鴻德海業知識產權代理有限公司 11412
• 代理人: 袁媛

1.一種用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，以能夠使如下的基因啟動的方式依次連接如下的基因：

(a)核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶小亞基基因；以及

(b)編碼目標蛋白的基因，

其中，上述核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶小亞基基因為由序列1表示的多核苷酸。

2.根據權利要求1所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，上述目標蛋白為選自由結構蛋白質、調節蛋白質、儲存蛋白質、移動蛋白質、防御蛋白質及報告蛋白組成的組中的一種以上的蛋白質。

3.根據權利要求1所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，上述目標蛋白為選自由抗原、抗體、抗體片段、轉錄因子、毒蛋白、激素、激素類似物、細胞因子、酶、酶抑制劑、轉運蛋白、受體、受體的片段組成的組中的一種以上的蛋白質。

4.根據權利要求1所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，上述基因構建體還包含位于核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶小亞基基因的5’末端的啟動子基因。

5.根據權利要求4所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，上述啟動子選自來源于花椰菜花葉病毒的35S啟動子、來源于花椰菜花葉病毒的19S核糖核酸啟動子、植物的肌動蛋白啟動子及泛素蛋白質啟動子。

6.根據權利要求1所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，上述基因構建體還包含位于編碼目標蛋白的基因的3’末端的蛋白標簽基因。

7.根據權利要求6所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體，其特征在于，上述蛋白標簽為選自由Avi標簽、鈣調蛋白標簽、聚谷氨酸標簽、E標簽、FLAG標簽、HA標簽、His標簽、Myc標簽、S標簽、SBP標簽、免疫球蛋白-Fc標簽、CTB標簽、Softag1標簽、Softag3標簽、鏈球菌標簽、TC標簽、V5標簽、VSV標簽及Xpress標簽組成的組中的一種。

8.一種重組表達載體，其特征在于，包含權利要求1至7中任一項所述的用于高表達目標蛋白的基因構建體。

9.一種高表達目標蛋白的轉化植物體的制備方法，其特征在于，包括：

制備權利要求8所述的重組表達載體的步驟；以及

將上述重組表達載體導入植物體的步驟。

10.根據權利要求9所述的轉化植物體的制備方法，其特征在于，在將上述重組表達載體導入植物體的步驟中，使用選自由基于土壤桿菌-介導的方法、基因槍轟擊法、碳化硅晶須法、超聲波處理法、電穿孔法及聚乙二醇-介導性轉化方法組成的組中的一種以上。

11.一種目標蛋白的生產方法，其特征在于，包括：

步驟(a)，制備根據權利要求7所述的重組表達載體；

步驟(b)，通過將上述重組表達載體導入植物來制備轉化植物體；

步驟(c)，培養上述轉化植物體；以及

步驟(d)，從上述轉化植物體或培養液分離純化目標蛋白。

12.根據權利要求11所述的目標蛋白的生產方法，其特征在于，上述植物為缺失存在于基因組中的核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶小亞基基因的植物。