[發明專利]一種酶催化與高溫水解相結合的制備羥基酪醇的方法

有效

• 申請號: 201710358546.8
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN107217076B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 余世袁;劉敏;勇強;連之娜;朱均均
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C07C37/055;C07C39/11
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發明公開了一種酶催化與高溫水解相結合的制備羥基酪醇的方法，先以富含β?葡萄糖苷酶的纖維素酶的用量為10?60FPU/g橄欖苦苷對橄欖苦苷進行酶解反應，然后不經處理直接控溫80?100℃繼續水解24h以上，獲得橄欖苦苷的降解率95%以上，羥基酪醇的得率80%以上的羥基酪醇溶液。本發明采用酶催化和高溫水解相結合的方法，從油橄欖葉提取物中制備羥基酪醇，以溫和的酶催化進行反應，酶的用量較少，節約成本，得到了較高的橄欖苦苷降解率為95%以上，和羥基酪醇得率為80?90%，特別是羥基酪醇的得率獲得顯著提高，為工業化生產打下基礎。

技術領域

本發明涉及生物化學和醫藥保健品領域，涉及從天然產物油橄欖葉提取物中制備羥基酪醇的方法，具體為一種酶催化與高溫水解相結合的制備羥基酪醇的方法。

背景技術

油橄欖(Olea europaea L.)又名齊墩果，屬木犀科木犀欖屬常綠喬木，地中海國家，如西班牙、希臘、意大利、突尼斯等為其集中產地，種植面積約占全球種植面積的95％。我國于20世紀60年代開始大面積引種油橄欖樹，主要分布在中西部如甘肅、四川等地，面積45萬多畝，共有500多萬株。每摘取100kg的油橄欖果大約可以得到3-5kg的油橄欖葉。目前油橄欖葉一般會被燃燒或作為有機肥。我國每年因對油橄欖樹進行維護剪枝產生的葉子多達60萬噸。油橄欖葉被丟棄或焚燒，造成資源的浪費及生態環境的破壞。而油橄欖葉中含有豐富多樣的酚類化合物，已知的主要功能性成分有簡單酚類化合物、裂環烯醚萜(橄欖苦苷)和木酚素類三類抗氧化劑。其中油橄欖葉中橄欖苦苷的含量可以達到10-17％。

羥基酪醇化學名為3,4-二羥基苯乙醇，分子式C₈H₁₀O₃，分子量154。它是一種來自橄欖的酚類化合物之一，被認為是天然的最強的抗氧化劑之一。羥基酪醇有很強的清除自由基的能力，展現出許多生物學活性，其中包括抗癌活性、抗炎活性、抗菌活性、抗基因毒性、抗細胞毒素、預防高膽固醇、預防代謝疾病、預防氧化應激、預防消化紊亂等。

游離的羥基酪醇很少存在于自然界中，以酯化物存在于橄欖各個部位的橄欖苦苷水解后可以得到羥基酪醇。由于其制備工藝較為復雜，商品的羥基酪醇的價格一般較為昂貴。利用酸、堿制備羥基酪醇時，因為酸、堿水解對設備的要求高，腐蝕性大，中和麻煩，中和后生成的小分子氯化鈉或硫酸鈣容易吸附小分子的羥基酪醇，使得后續的分離、純化較為困難。用化學的方法合成羥基酪醇雖有少量的報道，但合成的成本較高，而且得率較低。因此，通過溫和的酶催化反應制備羥基酪醇具有廣泛的前景。CN104926615A中報道了利用半纖維素酶制備羥基酪醇的方法，橄欖苦苷(含量38.6％)的降解率為85.28％，羥基酪醇的含量為6.07％(羥基酪醇的得率相當于55.18％)。Hamza等利用黑曲霉纖維素酶酶解橄欖葉提取物，羥基酪醇的得率為23.25％。原姣姣等研究了橄欖苦苷(含量81.04％)半纖維素酶解制備羥基酪醇，得到橄欖苦苷的降解率為98.54％，羥基酪醇含量為11.31％(羥基酪醇的得率相當于40.31％)。卜文文等采用β-葡萄糖苷酶水解橄欖葉提取物制備羥基酪醇，HT的得率為54.88％。因此，利用生物酶催化技術，提高羥基酪醇的得率方面有很大的提升空間。

發明內容

發明目的：針對利用生物酶催化技術制備羥基酪醇的過程中，存在得率較低的缺點，本發明提供了一種酶催化與高溫水解相結合的制備羥基酪醇的方法，以期獲得較高的橄欖苦苷降解率和較高的羥基酪醇得率。

技術方案：為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種酶催化與高溫水解相結合的制備羥基酪醇的方法，先以富含β-葡萄糖苷酶(BG)的纖維素酶的用量為10-60FPU/g橄欖苦苷對橄欖苦苷進行酶解反應，然后不經處理直接控溫80-100℃繼續水解24h以上，獲得橄欖苦苷的降解率95％以上，羥基酪醇的得率80％以上的羥基酪醇溶液。

所述的酶催化與高溫水解相結合的制備羥基酪醇的方法，橄欖苦苷的濃度28-50g/L。