[發明專利]一種反膠團包合胰島素體系的制備方法

在審

• 申請號: 201710354543.7
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN106983720A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 黃潔;周良普;金志敏;馮文杰;張銀華
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: A61K9/107
• 分類號: A61K9/107;A61K38/28;A61K47/14;A61P3/10
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所(普通合伙)33230
• 代理人: 魏星

技術領域

本發明屬于胰島素口服制劑制備技術領域，具體涉及一種反膠團包合胰島素體系的制備方法。

背景技術

胰島素是胰島素依賴型(1型)與嚴重的胰島素非依賴型(2型)糖尿病最有效的治療藥物之一。胰島素治療患者一般需終生用藥，而長期皮下注射帶來了諸多的不便和巨大的痛苦。因此，廣大科研工作者一直致力于研制非注射型的胰島素制劑。其中，口服胰島素制劑是目前公認最理想的非注射臨床給藥方式。胰島素藥物的口服劑型主要需要克服腸黏膜上皮存在的對多肽蛋白質類藥物的吸收屏障，還需要使胰島素避免被胃腸道的各種蛋白酶分解、消化。

在過去的幾十年中對于克服常規口服胰島素的缺點和限制做了各種不同的嘗試。主要集中在口服胰島素的研制取得成功將要克服酶的降解、提高上皮細胞的滲透率以及在處理加工中保存藥物的生物活性等方面。目前主要在脂質體、納米粒、乳劑、油相溶液及其他劑型等方面研究。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有口服胰島素的缺陷和技術不足，在不犧牲植物多酚分子優異的生理、生物活性功能的前提下，通過植物多酚脂肪酸酯化合成新型表面活性劑，制備搭載胰島素的反膠團口服運輸系統。不僅細胞能夠吸收，在有效的解決胰島素口服運輸過程中保存生物活性的同時，能夠有效控制糖尿病患者的血糖。

本發明解決技術問題所采用的技術方案為：

一種反膠團包合胰島素體系的制備方法，首先以植物多酚和脂肪酰氯為原料，通過酯化反應將脂肪鏈連接到植物多酚的羥基上，合成植物多酚脂肪酸酯。緊接著以植物多酚脂肪酸酯作為表面活性劑，配置反膠團體系(包含表面活性劑、水相、有機相，其中有機相為花生油、玉米油、液體石蠟中的一種)。然后將反膠團體系與胰島素按照一定比例震蕩混合，植物多酚通過氫鍵、疏水鍵與胰島素蛋白發生可逆絡合作用，將胰島素保護在反膠團的“水池”中，得到搭載胰島素的反膠團體系。

一種反膠團包合胰島素體系的制備方法，具體包括以下步驟：

表面活性劑合成：稱取植物多酚、10倍植物多酚質量的1,4‐二氧六環，加入反應容器中，攪拌使其溶解，升溫至40～60℃后，通入氮氣，加入吡啶，再滴加脂肪酰氯，定時用pH試紙在冷凝管口檢測，至HCl不再生成(pH值不變)時停止反應，反應完畢后，用水洗滌三次，洗除催化劑和未反應的植物多酚，分去水層后，加入吸水劑去除微量水分，減壓濃縮，低溫下真空蒸除溶劑，再于高真空度干燥箱中干燥，得化學改性產物植物多酚脂肪酸酯乳化劑；所述脂肪酰氯可以結合在植物多酚分子中的任何一個或多個羥基位置，植物多酚分子上的羥基結合的脂肪酰氯分子可以相同或者不同。

反膠團體系配制：將步驟(1)所得表面活性劑和助溶劑甘油加入到有機試劑中，攪拌至表面活性劑完全溶解，再加入水，使體系Wo值＝15～35，表面活性劑濃度為200～300mM，靜置所得溶液即為反膠團體系；

胰島素溶液配置：將胰島素加入到0.01～0.02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰島素的濃度為2.6～3.4g/l，得到胰島素溶液；

(4)胰島素置換過程：將步驟(3)配置的胰島素溶液與步驟(2)配置的反膠團體系于搖床震蕩混合5～40min后，靜置分層后取有機相，即得反膠團包合胰島素體系，后續可以做成軟膠囊等終劑型。

有研究表明，植物多酚可以增強胰島素活性。在一個體外的附睪組織細胞檢測中茶被證明至少增加胰島素15倍的活性，且活性成分主要是表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其次是表兒茶素沒食子酸酯(Richard A.Anderson,et al(2002)J.Agric.Food Chem.50:7182‐7186)。由于天然植物多酚的分子結構中含有大量的酚輕基，其易溶于水而難溶于油。因而，在不犧牲植物多酚分子優異的生理、生物活性功能的前提下，可以通過分子結構的改變來達到其在油脂性環境中具有較大溶解度的目的。參照表面活性劑的增溶原理，在植物多酚的分子結構中引入脂肪鏈，合成的植物多酚脂肪酸酯符合表面活性劑的特征，一端為親水基團，另一端為疏水基團。

利用表面活性劑植物多酚脂肪酸酯乳化劑在有機相中形成的反膠團，反膠團在有機相內形成一個親水微環境，使蛋白質類生物活性物質溶解于其中，從而避免在有機相中發生不可逆變性。

作為優選，步驟(1)所述植物多酚選自茶多酚、葡萄籽多酚和單寧酸中的一種。

作為優選，步驟(1)所述植物多酚與脂肪酰氯物質的量之比為1:1～20。

作為優選，步驟(1)所述植物多酚與吡啶的質量之比為1:0.5～1.4。