[發(fā)明專利]一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710343205.3
• 申請(qǐng)日: 2017-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN107115343A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳皓;王毅;姜文兵;陳曉曙;吳悠揚(yáng);林偉;朱寧;胡逸人;李林錦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 溫州市人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K31/4174
• 分類號(hào): A61K31/4174;A61K31/343;A61K31/661;A61K31/4245;A61P11/00
• 代理公司: 浙江納祺律師事務(wù)所33257
• 代理人: 朱德寶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型。

背景技術(shù)

胺碘酮又稱乙胺碘呋酮，是含碘苯丙呋喃衍生物，作為Ⅲ類抗心律失常藥物廣泛應(yīng)用于臨床，主要用于治療室性心律失常和心房顫動(dòng)。其副作用主要表現(xiàn)為肺毒性、甲狀腺毒性、心臟毒性、消化系統(tǒng)毒性等，其中肺毒性反應(yīng)最為嚴(yán)重，其發(fā)生率在1％-10％，肺毒性主要表現(xiàn)為肺纖維化，因臨床缺乏有效治療措施，其死亡率高達(dá)33％，嚴(yán)重影響人民生命健康。但胺碘酮在抗心律失常方面療效確切、穩(wěn)定，目前尚無其他類似藥物替代，在臨床上應(yīng)用仍十分廣泛。因此，闡明胺碘酮誘導(dǎo)肺纖維化機(jī)制對(duì)降低其藥物毒副作用，逆轉(zhuǎn)或延緩肺纖維化進(jìn)程、改善患者預(yù)后、提高生存率有重要的臨床意義。目前其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，無有效的治療方法，肺纖維化動(dòng)物模型是研究疾病發(fā)生發(fā)展和新型藥物必不可少的實(shí)驗(yàn)手段，在嚴(yán)格控制各種條件下，利用動(dòng)物模型，我們可以觀察肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展和疾病轉(zhuǎn)歸以及這些不同改變?cè)谛螒B(tài)學(xué)、影像學(xué)和分子生物學(xué)上的表現(xiàn)等規(guī)律。因此，建立一種簡便、成熟而穩(wěn)定的符合胺碘酮誘導(dǎo)肺纖維化發(fā)病過程的動(dòng)物模型，對(duì)深入研究肺纖維化發(fā)病機(jī)制、開發(fā)先進(jìn)的治療方法具有極其重要的意義。

現(xiàn)有的構(gòu)建肺纖維化動(dòng)物模型的方法有很多，主要包括：氣管切開術(shù)、氣管插管、額鏡引導(dǎo)灌注、腹腔注射、鼻腔給藥、靜脈滴注化學(xué)藥物法和口咽部給藥法，造模方法有很多，但是各自存在缺點(diǎn)，比如氣管切開對(duì)標(biāo)本鼠的外源性創(chuàng)傷大操作繁雜，對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的影響較大，且實(shí)施操作耗費(fèi)時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，操作方便，在給藥過程對(duì)大鼠損傷小。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種大鼠肺細(xì)胞纖維化模型，建立方法如下：將大鼠進(jìn)行稱重，隨機(jī)分為給藥組和對(duì)照組，腹腔注射麻藥進(jìn)行麻醉，將其放于籠中，讓其自然暈倒，對(duì)于給藥組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品，所述藥品中含有胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉，給藥的過程中觀察小鼠的呼吸情況，給藥結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長20-30天；對(duì)于對(duì)照組采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于等體積0.9％氯化鈉注射液，給樣的過程中觀察小鼠的呼吸情況，給樣結(jié)束，讓大鼠繼續(xù)生長20-30天；然后給藥組和對(duì)照組用戊巴比妥鈉麻醉處死大鼠,迅速開胸,取出肺臟,部分用于制作組織切片,部分速凍于液氮備作羥脯氨酸含量測定。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述藥品中胺碘酮和鹽酸萘甲唑啉濃度分別為3-5mg/ml和0.03-0.06mg/ml。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述藥品中含有濃度為5-10μM的1-磷酸鞘氨醇和1-5μM的激動(dòng)劑SEW2871。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述胺碘酮的給藥量為3-5mg/kg體重。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述采用加樣槍通過鼻腔給藥的方式給于藥品具體步驟如下：將大鼠脖頸處毛發(fā)剔除，準(zhǔn)備一個(gè)口部邊沿帶彈性緊固帶的透明塑料袋，將所述透明塑料袋套在大鼠頭部，使所述透明塑料袋口部邊沿的彈性緊固帶套設(shè)在大鼠脖頸處，在透明塑料袋上設(shè)置兩個(gè)洞，其中一個(gè)洞中插入導(dǎo)氣管，所述導(dǎo)氣管另一端連接有三通閥，所述三通閥一端和抽氣泵相連，還有一端和吹氣泵相連，另一個(gè)洞中插入軟質(zhì)導(dǎo)藥管，所述導(dǎo)藥管一端和加樣槍的針頭相連，另一端和大鼠一側(cè)鼻孔相連，所述導(dǎo)氣管和導(dǎo)藥管外側(cè)壁與透明塑料袋相接處無縫貼合；在大鼠暈倒后，使大鼠呈仰臥位狀以彈力固定夾將其四肢分別固定于鼠板上；給藥步驟如下，首先打開抽氣泵和吹氣泵，操作者一手控制三通閥，另一手控制注射器，注射器內(nèi)裝定量藥品，先讓抽氣泵和導(dǎo)氣管相通將透明塑料袋中空氣抽出，保持3-5s，迅速切換三通閥使吹氣泵和導(dǎo)氣管相連，與此同時(shí)，迅速推注藥品100-200μl進(jìn)入鼻腔內(nèi)，使藥物隨大鼠吸氣時(shí)的氣流充分進(jìn)入支氣管內(nèi)，推注完畢后，保持5-10s，重復(fù)上述給藥步驟若干次，解除鼠四肢彈力固定夾將鼠放回鼠籠內(nèi)待復(fù)蘇，然后置于恒溫大鼠房飼養(yǎng)。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述加樣槍的加樣速度為15-30μL/min。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，鼻腔給藥后將小鼠直立旋轉(zhuǎn)2-3min，利用體位及重力作用，盡量使藥液在兩側(cè)肺內(nèi)均勻分布。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，鼻腔給藥時(shí)把鼠板豎起與桌面成70-80°夾角，然后向右傾斜與桌面成60-70°夾角，將藥品吹入單側(cè)肺中。