[發明專利]一種利用膠體金免疫層析試紙條檢測乳中TEM型β?內酰胺酶的方法

在審

• 申請號: 201710341429.0
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107490694A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 于國萍;范美婧;陳媛;藏小丹;岳崇慧;劉鵬;孫琪;董良偉
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用膠體金免疫層析試紙條檢測乳中TEM型β-內酰胺酶的方法，其特征在于所述方法步驟如下：步驟一：膠體金的制備及鑒定；步驟二：金標抗體的制備與純化；步驟三：條件的優化；步驟四：試紙條性能的檢測。

2.按照權利要求1所述的測序方法，其特征在于步驟一中所述的目測制得的膠體金顏色呈酒紅色，透明無沉淀，質量較好；紫外掃描計算得出膠體金顆粒平均直徑為20nm；透射電鏡下(200nm)觀察到的膠體金顆粒，大小基本一致，且分散性比較好，沒有聚集現象，最終測得膠體金顆粒平均直徑約為20.6nm，與紫外測得結果基本一致。

3.按照權利要求1所述的測序方法，其特征在于步驟二中所述的最適標記pH值通過添加K₂CO₃的量來確定，添加量為10μL/mL；最適標記抗體添加量為16μg/mL，制得的金標抗體離心純化后進行紫外掃描，膠體金的最大吸收峰為523nm，金標抗體的最大吸收峰為528nm，最大吸收峰前移，因為蛋白質與膠體金發生結合，表明已標記成功且金標抗體有活性。

4.按照權利要求1所述的測序方法，其特征在于步驟三中所述的金標抗體復溶液選擇第一種復溶液(1％BSA、5％蔗糖、0.05％Tween-20、0.02％疊氮鈉)；單克隆抗體選擇不稀釋，羊抗鼠二抗稀釋四倍；NC膜選用Millipore 135；金標墊選擇ahlstrom8964金標墊，使用前用5％蔗糖處理；樣品墊選擇GF2-Ⅱ樣品墊，處理液為PBS緩沖溶液(內含1％BSA、0.5％tween-20、0.05％NaN3)。

5.按照權利要求1所述的測序方法，其特征在于步驟四中所述的本實驗制得的試紙條的最低檢測線為6IU/mL，重復性良好，選擇4℃條件貯存，至少可以儲存四個月。