[發(fā)明專利]三維肺微組織模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710341323.0
• 申請(qǐng)日: 2017-05-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107267439A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李瑞賓;鄭會(huì)珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/0786;C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)32257
• 代理人: 李廣

1.一種三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)使用熒光蛋白分別標(biāo)記LC-3的肺巨噬細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞，然后共混于聚陰離子聚電解質(zhì)的水溶液中，得到細(xì)胞共混液；

(2)利用靜電液滴法將步驟(1)得到的所述細(xì)胞共混液滴入含二價(jià)金屬離子的凝膠浴中，形成載細(xì)胞凝膠微球；

(3)將步驟(2)得到的所述載細(xì)胞凝膠微球培養(yǎng)14-28天，得到所述三維肺微組織模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，LC-3的肺巨噬細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞在熒光蛋白標(biāo)記后，二者為不同顏色。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，肺巨噬細(xì)胞為THP-1、RAW264.7或U937細(xì)胞，肺上皮細(xì)胞為BEAS-2B、A549、NCI-H441或TC-1細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述肺巨噬細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞的個(gè)數(shù)比為1:2-2:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述細(xì)胞共混液中的細(xì)胞密度為2×10⁵-1×10⁷cells/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述聚陰離子聚電解質(zhì)為海藻酸鈉、透明質(zhì)酸、瓊脂、明膠和果膠中的一種或幾種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述聚陰離子聚電解質(zhì)的水溶液的濃度為1％w/v-1.5％w/v。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三維肺微組織模型的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(2)中，所述含二價(jià)金屬離子的凝膠浴為含二價(jià)金屬離子的氯化鈉溶液，所述金屬離子為鈣離子、鋇離子、鎂離子和鐵離子中的一種或幾種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法所構(gòu)建的三維肺微組織模型作為體外檢測(cè)和評(píng)價(jià)肺自噬效應(yīng)模型的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

將待測(cè)物加入所述三維肺微組織模型中，定性或定量檢測(cè)LC-3II在肺巨噬細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞中的表達(dá)，以判定所述待測(cè)物引發(fā)的肺自噬效應(yīng)類型。