[發明專利]碳點/銅納米簇復合物比率熒光多巴胺探針的制備方法

有效

• 申請號: 201710325071.2
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN106970061B
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 金輝;桂日軍;王宗花
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張世功

1.一種碳點/銅納米簇復合物比率熒光多巴胺探針的制備方法，其特征在于具體包括以下步驟：

(1)制備藍色熒光發射的碳點：將0.1克檸檬酸鈉與0.75克碳酸氫銨溶解于10毫升二次蒸餾水中，攪拌均勻形成均質混合水溶液，將其轉移至高壓反應釜中，在180℃下攪拌反應4小時，然后冷卻至室溫，采用分子量為1000道爾頓透析袋滲析處理24小時，透析袋中溶液采用旋轉蒸發儀除水得到懸濁液，采用丙酮沉淀產物，離心分離，乙醇洗滌得到沉淀物，再干燥除水處理得到碳點；

(2)碳點表面進行氨基苯硼酸改性：稱取20毫克1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)鹽酸鈉，10毫克N-羥基琥珀酰亞胺鈉(NHS)和20毫克氨基苯硼酸溶于20毫升二次蒸餾水，混合均勻形成均質水溶液，充分攪拌1小時后，加入1毫克/毫升的碳點水分散液，在室溫下繼續攪拌反應2小時，反應產物采用離心分離除去未偶聯的氨基苯硼酸，上層懸濁液用丙酮沉淀，離心分離，用乙醇反復洗滌得到沉淀物，然后干燥處理得到氨基苯硼酸改性的碳點；

(3)制備牛血清白蛋白穩定的銅納米簇：量取0.25毫升0.1摩/升的氯化銅水溶液與20毫升5毫克/毫升的牛血清白蛋白，在室溫下充分攪拌10分鐘形成均質混合液，然后滴加質量分數50％的0.5毫升氨水，繼續攪拌反應5小時，反應產物用丙酮沉淀，離心分離，乙醇反復洗滌，在60℃下干燥得到牛血清白蛋白穩定的銅納米簇；

(4)碳點/銅納米簇復合物的制備：在5毫升pH＝7.4物質的量濃度為1毫摩/升的磷酸鹽水緩沖液中加入15毫克EDC鹽酸納和9毫克NHS，充分攪拌均勻后再加入10毫克牛血清白蛋白穩定的銅納米簇，在室溫下連續攪拌反應30分鐘，然后滴加5毫升1毫克/毫升的碳點水分散液，保持連續攪拌反應8小時，反應產物用丙酮進行沉淀處理，沉淀物離心分離，乙醇重復洗滌，干燥處理得到碳點/銅納米簇復合物；

(5)在50毫升pH＝7.4物質的量濃度為1毫摩/升的磷酸鹽水緩沖液中加入碳點/銅納米簇復合物，其濃度調節至0.1毫克/毫升，在緩慢攪拌下加入多巴胺形成均質的混合體系，其中的多巴胺濃度調節為0.1-100微摩/升，采用熒光光譜儀測定混合體系的熒光發射光譜，擬合比率熒光峰強度與相應多巴胺物質的量濃度之間的線性關系，進而構建出基于碳點/銅納米簇復合物的比率熒光多巴胺探針。