[發明專利]含人干細胞因子的皮膚修復液及其制備方法

有效

• 申請號: 201710322964.1
• 申請日: 2017-05-09
• 公開（公告）號: CN106924719B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 車七石
• 申請（專利權）人: 廣州潤虹醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K9/08;A61K47/46;A61K47/10;A61K47/42;A61K47/20;A61K47/12;A61P3/10;A61P17/02
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.含人干細胞因子的皮膚修復液在制備促進糖尿病皮膚創傷修復的藥物中的用途，其特征在于，由以下質量分數的組分組成：人干細胞因子1.0×10^-3～0.1％、穩定劑1～5％、莎梵婷40～80％、聚乙二醇4005～20％和水余量；所述穩定劑由以下濃度的組分組成：人胎盤間充質干細胞碎片0.5～3mg/mL、牛磺酸2～6mg/mL和α-酮戊二酸1×10^-3～5×10^-3mol/L；所述人胎盤間充質干細胞碎片由以下步驟制得：

S1、胎盤標本處理：取健康母體胎盤，檢驗檢疫合格后，將胎盤組織進行組織消化，得細胞懸液；

S2、不連續Percoll梯度密度分離：在50mL離心管中逐層鋪入7個密度的Percoll分離液，每個密度5mL，再緩緩加入5mL細胞懸液，使用水平離心機室溫下1200g離心20min，小心棄除離心管20mL刻度以上的液體，收集12.5～20.0mL刻度的細胞層和12.5～7.5mL刻度的液體，分別放入不同離心管里，用D-Hank’s液稀釋5倍后，室溫下1000g離心15min，

S3、純化：用含體積分數為10％胎牛血清(FBS)的DMEM/F12、丙酮酸鹽、10毫克/升亞硒酸鈉胰島素、2毫克/升乙醇胺和20毫微克/mL的bFGF配制成懸浮液，將密度梯度離心后的滋養細胞進行重懸，用差速貼壁法去除成纖維細胞后計數；

S4、傳代與鑒定：將上述滋養細胞接種于加入含有體積分數15％FBS的DMEM/F12培養液，放置于37℃、體積分數5％的CO₂飽和濕度培養箱內培養，每3d補加新鮮培養液，按1×10⁴cell/cm²傳代培養，培養液換為體積分數10％FBS的DMEM/F12培養基，細胞代數記為P1代，待細胞達到70～90％融合后，消化，按1×10⁴cell/cm²傳代培養，細胞代數記為P2代，收集P2代細胞，通過流式細胞儀鑒定，鑒定符合要求后使用D-Hank′s平衡鹽溶液洗滌細胞，離心粉碎，即得。

2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述皮膚修復液由以下質量分數的組分組成：人干細胞因子3.0×10^-3～0.08％、穩定劑2～5％、莎梵婷50～80％、聚乙二醇4005～10％和水余量。

3.如權利要求2所述的用途，其特征在于，所述穩定劑由以下濃度的組分組成：人胎盤間充質干細胞碎片1～2mg/mL、牛磺酸2～4mg/mL和α-酮戊二酸2×10^-3～5×10^-3mol/L。

4.如權利要求3所述的用途，其特征在于，所述穩定劑由以下濃度的組分組成：人胎盤間充質干細胞碎片1.5mg/mL、牛磺酸3.5mg/mL和α-酮戊二酸3.5×10^-3mol/L。

5.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的皮膚修復液為液體制劑。

6.如權利要求1～5任一所述的用途，其特征在于，所述皮膚修復液的制備方法包括以下步驟：

將聚乙二醇400和莎梵婷混合均勻后，加入穩定劑，渦旋混勻后，加入人干細胞因子水溶液，不斷渦旋使其形成均一穩定的溶液，即得。