[發(fā)明專利]一種側(cè)柏葉TLC鑒別方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710316581.3
• 申請(qǐng)日: 2017-05-08
• 公開（公告）號(hào): CN107132307A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石典花;張軍;戴衍朋;孫立立
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省中醫(yī)藥研究院
• 主分類號(hào): G01N30/90
• 分類號(hào): G01N30/90
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所37218
• 代理人: 李桂存

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種側(cè)柏葉TLC鑒別方法。

背景技術(shù)

側(cè)柏葉又名柏葉、叢柏葉、扁柏、云片柏等，是醫(yī)家所重視的治血良藥。中醫(yī)認(rèn)為側(cè)柏葉味苦，性微寒，無毒，入心、肝、大腸經(jīng)。具有涼血、止血、祛內(nèi)濕、散腫毒之功。可治吐血、鼻出血、尿血、血痢、崩 漏、風(fēng)濕痛、咳嗽、燙傷等癥。根據(jù)科學(xué)研究表明，側(cè)柏葉含大量的揮發(fā)油，油中主要成分為側(cè)柏烯、小茴香酮等，葉中還含有鉀、鈉、磷、氮、鈣、鎂、錳和鋅等多種微量元素。藥理實(shí)驗(yàn)表明，側(cè)柏葉煎劑能夠明顯的縮短出血時(shí)間及凝血時(shí)間，除此以外，還有鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰、鎮(zhèn)靜等作用。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，側(cè)柏葉對(duì)金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、卡他球菌、白喉?xiàng)U菌、傷寒桿菌等均有很好的抑制作用，有烏須發(fā)、止血、止咳喘的功效。

目前，對(duì)中藥材的理化鑒別方法，主要包括熒光法，微量升華法，顯色，沉淀、泡沫反應(yīng)，鈣鹽、鈉鹽等鑒別反應(yīng)，薄層色譜法（TLC）等。 其中，由于TLC法處理簡單，成本低，可同時(shí)對(duì)多個(gè)成分進(jìn)行一個(gè)比較，不需使用復(fù)雜儀器，應(yīng)用范圍最為廣泛。如2015版中國藥典側(cè)柏葉項(xiàng)下收載了目前法定的側(cè)柏葉TLC鑒別方法，但由于該法中采用的索氏提取步驟，至少需6小時(shí)，加熱回流步驟也需要1小時(shí)，操作繁瑣，操作時(shí)間長、有機(jī)試劑用量多導(dǎo)致成本較高等缺點(diǎn)，無法滿足實(shí)際應(yīng)用中快速、簡便的需求。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確，高效的側(cè)柏葉TLC鑒別方法是很有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，提供一種側(cè)柏葉TLC鑒別方法，具有專屬性強(qiáng)、操作簡單、快速、準(zhǔn)確，高效、成本低廉、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于對(duì)側(cè)柏葉藥材及飲片質(zhì)量快速檢測。

本發(fā)明技術(shù)方案如下：

一種側(cè)柏葉TLC鑒別方法，步驟包括：

（1）取待測樣品粉末 0.5～1.5g，置具塞錐形瓶中，加70％甲醇 10～30mL，超聲30min，過濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；

（2）取槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品，加乙醇配制為 0.05～0.15mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液；

（3）薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各 2～4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為（10:1:1）～ （14:1:1）的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑展開，取出，晾干，噴以1wt％的三氯化鋁-乙醇溶液，置紫外光燈365nm下檢視。

優(yōu)選地，步驟（1）中，各原料用量為待測樣品粉末1g、70％甲醇20mL。

優(yōu)選地，步驟（2）中，取槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品，加乙醇配制為0.1mg/mL的溶液。

優(yōu)選地，步驟（3）中，吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各 3μL，展開劑乙酸乙酯-甲酸-水的體積比為12:1:1。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述的薄層色譜法試驗(yàn)為2015年版中國藥典四部0502薄層色譜法。

所述的側(cè)柏葉TLC鑒別方法，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，則待測樣品為側(cè)柏葉。

側(cè)柏葉的止血有效成分通常認(rèn)為是槲皮素和鞣質(zhì)，實(shí)際上，本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)表明側(cè)柏葉中沒有槲皮素，只有槲皮苷，現(xiàn)有檢測方法中，也都是將槲皮苷水解成槲皮素后進(jìn)行鑒定。現(xiàn)有技術(shù)中，以藥典的鑒別方法為例，是將側(cè)柏葉葉綠素成分進(jìn)行提取后，再對(duì)其所含黃酮類成分槲皮苷進(jìn)行酸水解，水解成槲皮素，再用乙酸乙酯萃取，水洗，濃縮后進(jìn)行鑒定。由于其樣品制備過程涉及索氏提取，耗時(shí)至少6h，且以乙醚為提取液，操作具一定的危險(xiǎn)性，黃酮類成分提取、水解共計(jì)耗時(shí)1.5h。由于側(cè)柏葉中含有的是槲皮苷等黃酮類成分，本發(fā)明改變以往采用槲皮素為對(duì)照品的通用方法，不通過水解、索氏提取等步驟，在最優(yōu)條件下，直接將槲皮苷提取出來進(jìn)行鑒定，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明方法操作簡單，便捷，有效，且能發(fā)映出側(cè)柏葉自身的特點(diǎn)，可快速準(zhǔn)確用于對(duì)側(cè)柏葉進(jìn)行TLC鑒定。

本發(fā)明技術(shù)方案相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)有益效果為：

1、快速、簡便、重現(xiàn)性好：①節(jié)約時(shí)間：該法較藥典法省去藥典中索氏提取（至少6小時(shí)）、加熱回流1小時(shí)、酸水解等步驟，整體可將鑒定時(shí)間縮短90%。②節(jié)省試劑：上述步驟中的有機(jī)試劑均可節(jié)省，尤其是減少了乙醚的使用，減少操作過程的不適性和危險(xiǎn)性。③重現(xiàn)性好：該法較為簡單、易操作，重現(xiàn)性好。

2、以槲皮苷為對(duì)照更適宜于鑒別側(cè)柏葉：因側(cè)柏葉中含有槲皮苷不含槲皮素成分，因此更適于側(cè)柏葉的鑒別。

3、色譜清晰，各斑點(diǎn)分離良好：該方法所得圖譜的斑點(diǎn)清晰，分離良好，重現(xiàn)性好。