[發(fā)明專利]PPP1CA作為肝癌診斷和檢測預(yù)后的標(biāo)志物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710308690.0
• 申請日: 2017-05-04
• 公開（公告）號: CN107271670B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李良成;王琳鈞;徐振興;洪萬進;錢麗霞;裴雨晴
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué);廈門市中醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 姜成康

本發(fā)明公開了PPP1CA作為肝癌診斷和檢測預(yù)后的標(biāo)志物及其應(yīng)用。分別利用RT?PCR,Western Blot,免疫組化檢測了肝癌患者組織中PPP1CA的表達(dá)，與非癌組織相比，PPP1CA基因表達(dá)水平及蛋白水平明顯升高。而利用ELISA或免疫化學(xué)發(fā)光法檢測血液中PPP1CA的含量，與正常人相比，肝癌患者血清中PPP1CA顯著升高。分析顯示，組織或血樣中PPP1CA表達(dá)水平升高與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)；PPP1CA高表達(dá)的肝癌患者5年生存期縮短。因此可以通過檢測組織樣品或血樣中PPP1CA含量進行肝癌的診斷和預(yù)后判斷。為臨床上診斷和判斷治療預(yù)后提供了一種靈敏度更高、特異性更強的標(biāo)志物及方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床診斷領(lǐng)域，具體地說，涉及診斷肝癌的新的標(biāo)志物及其在診斷肝癌中的應(yīng)用

背景技術(shù)

由于肝癌發(fā)病機理復(fù)雜，因此，缺乏高效、特異的生物標(biāo)志物。因此本發(fā)明試圖尋找一個比現(xiàn)今常用的臨床使用的診斷標(biāo)志物更高效的、靈敏、特異的肝癌生物標(biāo)志物及其在診斷肝癌中的應(yīng)用。

目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的，用于診斷肝癌的生物標(biāo)志物是甲胎蛋白(AFP)，但AFP有其明顯的應(yīng)用限制。根據(jù)大量臨床樣本統(tǒng)計分析得出，其診斷特異性為85％-90％，但精確度僅為18％-60％。除了甲胎蛋白(AFP)作為肝癌診斷標(biāo)志物，之后國際上也有許多生物標(biāo)志物被用于和AFP共同檢測，以增加準(zhǔn)確性，如脫-γ-羧基凝血酶原(DCP)、甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)、骨橋蛋白(OPN)、磷脂酰肌醇聚糖3(GPC3)和高爾基體蛋白-73(GP73)。但這些標(biāo)志物在特異性和靈敏性方面與AFP相比，并沒有優(yōu)勢。因此，AASLD(AmericanAssociation for the Study of Liver Disease,美國肝病研究協(xié)會)認(rèn)為AFP“缺乏充分的敏感性和特異性來監(jiān)視和診斷HCC”。EASL(European Association for the Study ofthe Liver，歐洲肝臟研究協(xié)會)也不推薦使用AFP用于HCC的臨床診斷。

另外，由于目前缺乏高效、特異的肝癌診斷標(biāo)志物，所以趙運勝等在國內(nèi)利用血清，對低濃度甲胎蛋白(AFP)原發(fā)性小肝癌患者血清進行了高爾基體蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、磷脂酰基醇蛋白聚糖3(GPC-3)和異常凝血酶原(DCP)聯(lián)合檢測。結(jié)果顯示，四種標(biāo)志物檢測的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確率和曲線下面積分別為78.0％,94.0％,88.7％和0.867。仍然無法滿足臨床上對肝癌的高效、簡便、特異性檢測的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于診斷肝癌的新的標(biāo)志物、診斷試劑盒及引物和抗體。可作為高特異性、高靈敏性的肝癌早期診斷和判斷治療預(yù)后的檢測標(biāo)志物。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種PPP1CA基因及蛋白作為診斷肝癌標(biāo)志物的用途。

進一步，所述的檢測是血清檢測。

進一步，所述的檢測也包括組織樣品檢測。

本發(fā)明還提供一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒內(nèi)含有PPP1CA基因的檢測引物或PPP1CA蛋白的單克隆或多克隆抗體。

進一步，所述PPP1CA基因的檢測引物是用于檢測SEQ ID NO:1序列的引物。

進一步，所述PPP1CA基因檢測引物序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

進一步，所述PPP1CA蛋白的序列如SEQ ID NO:2所示。

進一步，所述PPP1CA單克隆或多克隆抗體是抗如SEQ ID NO:2所示蛋白序列的抗體。

本發(fā)明還提供一種用于檢測肝癌的引物，其特征在于，所述引物的序列如SEQ IDNO:3和4所示。