[發明專利]一種ST培養基及其應用

在審

• 申請號: 201710306192.2
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN108795841A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 肖志華;劉智;張淑香
• 申請（專利權）人: 上海奧浦邁生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種ST培養基及其應用。本發明的ST培養基中不含有血清，采用所述ST培養基可實現對ST細胞的全懸浮無血清培養，且無需微載體，即可以實現高密度培養。由于ST細胞的懸浮培養過程中無需采用血清，而且該培養基中無動物來源的組分，消除了血清等動物來源組分所引起的批間差異和安全性問題，降低了生產成本，簡化了下游的分離純化步驟。另外該培養基中的組分確定，提高了從培養基供應，到細胞培養過程，到產品生產的可重復性和穩定性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種ST培養基及其應用。

背景技術

豬睪丸細胞(Swine Testicle，ST細胞)屬于成纖維二倍體細胞，可以連續傳代。ST細胞通常用于生產豬瘟病毒疫苗，豬瘟是豬的主要傳染病之一，屬于急性接觸性傳染病。豬瘟病毒可以在豬源細胞中增殖，如豬腎細胞(PK-15)和豬睪丸細胞(ST)，新合成的病毒大多吸附或結合在細胞上，只有極少量病毒存在于培養液中。

ST細胞適應于貼壁單層培養，常用的培養條件是傳統基礎培養基比如MEM添加10％胎牛血清(或小牛血清)，ST細胞貼壁比較牢且難于用胰酶消化。目前使用ST細胞生產豬瘟病毒大多采用滾瓶培養，細胞擴增階段使用10％牛血清，達到一定細胞密度后改用低血清培養基維持培養同時接毒。類似工藝的弊端是多方面的：

(1.)培養階段血清濃度高，細胞培養結果容易有批間差異；而且血清近幾年進口貨源不穩定價格昂貴；

(2.)含血清工藝可能帶來外源病毒、支原體污染等安全問題，比如由血清帶來的牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral diarrhea-mucosal Virus，BVDV)可能影響豬瘟病毒的表達，因此對于血清質量要求更高；

(3.)培養過程需要復雜的消化過程，即使采用微載體培養，因為ST細胞貼壁牢，球轉球有較大難度。

2010年以后，美國、歐盟和日本等發達國家逐漸停止在生物制藥中應用血清，FDA也停止含血清細胞培養工藝生產的生物技術新藥的申報受理。因此，開發ST細胞無血清無微載體懸浮培養工藝有極其重要的意義。

發明內容

現有技術中，用于培養ST細胞的培養基，均為有血清培養基，目前主要用于ST細胞的貼壁培養，比如轉瓶或微載體培養工藝中。血清的批間差異，造成轉瓶和微載體生產的疫苗在細胞質量、病毒產量和滴度方面產生較大的批間差異，而且血清的動物源性也帶來了外源病毒污染的高風險性。

為了克服現有技術中所存在的問題，本發明的目的在于提供一種無血清ST培養基及其應用。

為了實現上述目的以及其他相關目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種ST培養基，所述培養基的成分中包括：氯化鋁、乙酸鋇、生物素、氯化鎘、泛酸鈣、氯化膽堿、氯化鈷、氯化銅、葡萄糖、乙醇胺、硝酸鐵、葉酸、谷胱甘肽、4-羥乙基哌嗪乙磺酸、肌醇、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、組氨酸、羥脯氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、氯化鎂、氯化錳、煙酰胺、苯丙氨酸、Pluronic F68、氯化鉀、碘化鉀、腐胺、硫胺素、維生素B2、氯化銣、氯化鈉、氟化鈉、偏硅酸鈉、磷酸氫二鈉、丙酮酸鈉、精胺、維生素B1、維生素B12、氯化鋅和氯化鋯。

各成分的具體信息如下：