[發(fā)明專利]一種檢測(cè)呼吸道病原體的LAMP引物組合物及其試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710305673.1
• 申請(qǐng)日: 2017-05-03
• 公開（公告）號(hào): CN107099619A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方雪恩;王欣珍;王雄;楊茜;孔繼烈
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海速創(chuàng)診斷產(chǎn)品有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01;C12R1/35;C12R1/93
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種用于檢測(cè)呼吸道病原體的LAMP引物組合物，其特征在于，包括肺炎支原體引物組、肺炎衣原體引物組、甲/乙型流感病毒引物組、副流感病毒引物組、腺病毒引物組、呼吸道合胞病毒引物組中的至少一組；

其中，所述肺炎支原體引物組包括SEQ ID NO：1所示的肺炎支原體外引物1、SEQ ID NO：2所示的肺炎支原體外引物2、SEQ ID NO：3所示的肺炎支原體內(nèi)引物1和SEQ ID NO：4所示的肺炎支原體內(nèi)引物2；

其中，所述肺炎衣原體引物組包括SEQ ID NO：5所示的肺炎衣原體外引物1、SEQ ID NO：6所示的肺炎衣原體外引物2、SEQ ID NO：7所示的肺炎衣原體內(nèi)引物1和SEQ ID NO：8所示的肺炎衣原體內(nèi)引物2；

其中，所述甲/乙型流感病毒引物組包括SEQ ID NO：9所示的甲/乙型流感病毒外引物1、SEQ ID NO：10所示的甲/乙型流感病毒外引物2、SEQ ID NO：11所示的甲/乙型流感病毒內(nèi)引物1和SEQ ID NO：12所示的甲/乙型流感病毒內(nèi)引物2；

其中，所述副流感病毒引物組包括SEQ ID NO：13所示的副流感病毒外引物1、SEQ ID NO：14所示的副流感病毒外引物2、SEQ ID NO：15所示的副流感病毒內(nèi)引物1和SEQ ID NO：16所示的副流感病毒內(nèi)引物2；

其中，所述腺病毒引物組引物組包括SEQ ID NO：17所示的腺病毒引物組外引物1、SEQ ID NO：18所示的腺病毒引物組外引物2、SEQ ID NO：19所示的腺病毒引物組內(nèi)引物1和SEQ ID NO：20所示的腺病毒引物組內(nèi)引物2；

其中，所述呼吸道合胞病毒引物組包括SEQ ID NO：21所示的呼吸道合胞病毒外引物1、SEQ ID NO：22所示的呼吸道合胞病毒外引物2、SEQ ID NO：23所示的呼吸道合胞病毒內(nèi)引物1和SEQ ID NO：24所示的呼吸道合胞病毒內(nèi)引物2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)呼吸道病原體的LAMP引物組合物，其特征在于，進(jìn)一步包括質(zhì)控引物組，所述質(zhì)控引物組包括SEQ ID NO：25所示的質(zhì)控外引物1、SEQ ID NO：26所示的質(zhì)控外引物2、SEQ ID NO：27所示的質(zhì)控內(nèi)引物1和SEQ ID NO：28所示的質(zhì)控內(nèi)引物2。

3.一種含有權(quán)利要求1或2所述的LAMP引物組合物的試劑盒，其特征在于，還包括微流控芯片，所述微流控芯片設(shè)有互不連通的4個(gè)反應(yīng)檢測(cè)部分，每一反應(yīng)檢測(cè)部分均包括依次連通的儲(chǔ)液區(qū)、預(yù)留區(qū)、球閥和反應(yīng)孔，所述儲(chǔ)液區(qū)設(shè)置加樣孔，每個(gè)反應(yīng)檢測(cè)部分具有8個(gè)反應(yīng)孔，所述引物組合物中的每一引物組分別包被于對(duì)應(yīng)的反應(yīng)孔中。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，每一引物組中的外引物1的濃度為50μM，外引物2的濃度為50μM，內(nèi)引物1的濃度為50μM，內(nèi)引物2的濃度為50μM；其中，所述外引物1、外引物2、內(nèi)引物1、內(nèi)引物2的體積比為1:1:4～8:4～8。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒進(jìn)一步包括反應(yīng)液、DNA聚合酶、指示劑、陰性對(duì)照物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)液包括10～15mM dNTPs、10×Isothermal Amplification反應(yīng)緩沖液、100～200mM MgSO4水溶液；其中，所述反應(yīng)液中dNTPs、反應(yīng)緩沖液、MgSO4水溶液的體積比為7～9:4～6:2。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述指示劑包括HNB、Calcein、甲酚紅、酚紅、間甲酚紫、溴甲酚紫、中性紅、萘酚酞、百里酚藍(lán)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶為Bst DNA聚合酶，濃度為8U/μl。