[發明專利]感光嵌合GPCR蛋白

在審

• 申請號: 201710294286.2
• 申請日: 2012-06-22
• 公開（公告）號: CN107383184A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: M.范維克;S.克萊恩洛格
• 申請（專利權）人: 哈格－斯特萊特醫療科技股份公司
• 主分類號: C07K14/72
• 分類號: C07K14/72;C12N15/12;C12N5/10;A01K67/027;A61K38/17;A61P27/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 黃希貴

1.適于使光信號與內視網膜ON雙極細胞中的mGluR6的信號轉導級聯偶聯的嵌合GPCR蛋白，其包含來源于G蛋白偶聯受體(GPCR)蛋白家族的至少兩個成員的結構域，其特征在于至少兩個成員的第一個是促成其介導光激活的結構域中至少一些的感光GPCR，以及至少兩個GPCR家族成員的第二個促成其能夠使光激活與mGluR6的信號轉導級聯偶聯的結構域中的至少一些。

2.權利要求1的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成員來源于雙穩態感光色素。

3.權利要求1或2的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成員至少促成含有形成席夫堿以使生色團與GPCR共價結合的氨基酸殘基的結構域或促成在生理學對應物中形成生色團結合袋的所有結構域。

4.權利要求1-3中任一項的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成員是黑視蛋白，優選人黑視蛋白。

5.權利要求4的嵌合GPCR蛋白，其中所述黑視蛋白、特別是人黑視蛋白促成生色團結合袋，特別包含至少包括氨基酸序列Y149-K321的跨膜結構域TM3-TM7。

6.權利要求4的嵌合GPCR蛋白，其中所述黑視蛋白、特別是人黑視蛋白促成TM3-TM7和胞外環1-3 (EL1、EL2、EL3)及胞外N端，且其中mGluR6促成胞內環1 (IL1)、胞內環2 (IL2)、胞內環3 (IL3)和C端的至少一個。

7.權利要求1或5的嵌合GPCR蛋白，其中所述第一GPCR成員促成跨膜結構域TM1-TM7和胞外環1-3 (EL1、EL2、EL3)及胞外N端，并任選另外促成胞內結構域胞內環1 (IL1)、胞內環2 (IL2)、胞內環3 (IL3)和C端的至少一個而不是所有。

8.權利要求1-7中任一項的嵌合GPCR，其中所述第二GPCR成員促成來源于人mGluR6的胞內結構域的至少一個。

9.權利要求8的嵌合GPCR，其中所述來自mGluR6的至少一個胞內結構域包含mGluR6的第三胞內環和優選另外的第二胞內環，最優選第三胞內環、第二胞內環和C端。

10.具有氨基酸序列編號1.2、2.2、3.2、4.2和5.2的嵌合GPCR蛋白，其包括具有保守氨基酸和核苷酸取代的序列。

11.攜帶編碼權利要求1-10中任一項的嵌合蛋白的遺傳信息的核酸。

12.序列編號1、3、5、7和9的核酸，其包括編碼相同氨基酸序列和具有保守取代的氨基酸序列的序列。

13.攜帶編碼權利要求1-10中任一項的嵌合蛋白的遺傳信息或權利要求11或12的核酸的載體。

14.權利要求13的載體，其中所述載體是病毒載體，優選rAAV。

15.權利要求13或14的載體，其包含控制編碼權利要求1-10中任一項的嵌合蛋白的遺傳信息的表達、只在ON-雙極細胞中表達的視網膜蛋白質的啟動子/增強子序列。

16.權利要求15的載體，其中所述啟動子/增強子序列來源于Gγ13或TRPM1或mGluR6或夜盲蛋白的啟動子/增強子序列。

17.在ON-雙極細胞中含有嵌合體的轉基因敲入小鼠。

18.在ON-雙極細胞中含有嵌合體的轉基因斑馬魚。

19.藥物、載體或轉基因細胞系，特別是轉基因神經細胞系，所述細胞系包括包含權利要求11-16中任一項的遺傳信息或表達權利要求1-10中任一項的嵌合GPCR蛋白的視網膜細胞系、內視網膜細胞系和雙極細胞系以改善視力。

20.將權利要求11-16中任一項的遺傳信息體內引入眼中、特別是引入包括雙極細胞、特別是ON-雙極細胞在內的視網膜細胞中或者體外引入權利要求19的細胞培養物細胞系中的方法。

21.將權利要求11-16中任一項的遺傳信息引入眼中、特別是引入眼的玻璃體中或視網膜下間隙以靶向ON-雙極細胞用于電穿孔或病毒轉導的引入方法。

22.權利要求1-10中任一項的嵌合GPCR蛋白或權利要求11-16中任一項的編碼所述嵌合GPCR蛋白的遺傳信息和包含所述蛋白質或遺傳信息本身或者載體或細胞內的所述蛋白質或遺傳信息的組合物，其用于醫學療法以改善視力、特別用于部分或完全失明的治療、用于色素性視網膜炎(RP)、黃斑變性和其它形式的光感受器變性的治療。