[發明專利]重組大腸桿菌發酵產物中L-哌啶酸的萃取分離方法有效
| 申請號： | 201710288291.2 | 申請日： | 2017-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN106946765B | 公開（公告）日： | 2019-03-05 |
| 發明（設計）人： | 王丹;陳坤;張雨;孫譽州 | 申請（專利權）人： | 重慶大學 |
| 主分類號： | C07D211/60 | 分類號： | C07D211/60 |
| 代理公司： | 北京元本知識產權代理事務所 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 401331 重慶市沙坪壩區大學城南路*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 哌啶 制備 重組大腸桿菌 發酵產物 萃取分離 生物化工技術 全細胞催化 沉淀結晶 反應條件 反應萃取 工業利用 化工領域 磷酸丁酯 羅哌卡因 色素吸附 萃取體系 發酵液 反萃取 溶解度 三辛胺 正辛醇 專一性 提純 非鈉 鉀鹽 可用 萃取 殘留 應用 | ||
1.重組大腸桿菌發酵產物中L-哌啶酸的萃取分離方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)待分離樣品處理：取發酵原液，加入吸附劑充分混勻后加熱攪拌，再經濾紙、硅藻土和濾膜過濾，得澄清溶液；所述發酵原液中L-哌啶甲酸濃度為10～60g/L，pH值為2～10；所述發酵原液中含有鋅、鉀、鈉、銨、鐵、銅、鎂陽離子，含有磷酸根、硫酸根、氯離子陰離子，還含有葡萄糖、賴氨酸、檸檬酸有機成分；
2)反應萃?。喝〔襟E1)所述的澄清溶液調節pH值至7～10，用三辛胺-正辛醇-三磷酸丁酯的反應萃取體系溶液與澄清溶液混合后攪拌萃取；所述反應萃取體系溶液中的三辛胺、正辛醇和三磷酸丁酯的摩爾比為1：1：1～1：3：2；
3)反萃?。簩⒉襟E2)中攪拌萃取后的溶液進行離心操作，取上清液，在上清液中加入等體積的水介質混勻后攪拌，攪拌結束后，取下層水相，得L-哌啶酸水溶液；
4)溶析結晶：將步驟3)所述L-哌啶酸水溶液調節pH值至6.0-6.5，加入有機溶劑進行溶析，析出針狀晶體L-哌啶酸。
2.根據權利要求1所述的萃取分離方法，其特征在于，步驟1)中加熱攪拌的速率為1000～2000r/min，加熱溫度為45～75℃，加熱攪拌時間為1～1.5h。
3.根據權利要求1所述的萃取分離方法，其特征在于，步驟1)中濾膜過濾為至少一次0.2～0.8μm濾膜過濾。
4.根據權利要求1所述的萃取分離方法，其特征在于，步驟2)所述反應萃取體系溶液與所述澄清溶液的體積比為1：1～1：2；步驟2)中攪拌速率為100～300r/min，攪拌時間為20～60min。
5.根據權利要求1所述的萃取分離方法，其特征在于，步驟3)所述離心操作的操作條件為：2500～4000r/min，15～25℃，5～10min；步驟3)中攪拌速率為100～300r/min，攪拌時間為20～60min。
6.根據權利要求1所述的萃取分離方法，其特征在于，步驟4)中用0.5mol/L稀鹽酸調節pH值至6.0-6.5；所述有機溶劑包括丙酮。
7.一種萃取體系在萃取分離重組大腸桿菌發酵產物中L-哌啶酸中的應用，所述萃取體系由三辛胺、三磷酸丁酯和正辛醇組成；三辛胺、正辛醇和三磷酸丁酯的摩爾比為1：1：1～1：3：2。
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