[發明專利]融合表達雞傳染性法氏囊病毒VP2蛋白和沙門菌屬外膜蛋白的重組乳酸菌菌株及其用途

有效

• 申請號: 201710278425.2
• 申請日: 2017-04-25
• 公開（公告）號: CN107099496B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 崔紅玉;王笑梅
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/62;C07K19/00;A61K39/295;A61K39/112;A61K39/12;A61P31/04;A61P31/14;C12R1/01
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種融合表達雞傳染性法氏囊病毒VP2蛋白和沙門菌屬外膜蛋白的重組乳酸菌菌株及其用途。本發明所述的重組乳酸菌菌株，含有經優化后的編碼雞傳染性法氏囊病毒VP2蛋白的基因序列以及編碼沙門菌屬外膜蛋白OMP的基因序列。實驗證明該重組乳酸菌菌株其能夠高效融合表達VP2蛋白和外膜蛋白OMP，且以可溶性形式存在于細胞質中。將本發明的重組乳酸菌菌株直接作為疫苗免疫雞，實驗結果表明：該重組乳酸菌菌株能有效誘導機體產生特異性的免疫應答，主要產生特異性中和抗體，使免疫雞獲得100％的抵抗高致病力vvIBDV致死性攻擊的保護，并可清除體內殘留的病毒，達到清除性免疫的目的。因此，本發明的提出為雞傳染性法氏囊病的防治提供了一種新的技術手段。

技術領域

本發明涉及一種重組乳酸菌菌株及其所融合表達的蛋白和用途，特別涉及一種融合表達雞傳染性法氏囊病毒病毒VP2蛋白和沙門菌屬外膜蛋白OMP的重組乳酸菌菌株，還涉及該重組乳酸菌菌株及其所融合表達得到的雞傳染性法氏囊病毒病毒 VP2蛋白和沙門菌屬外膜蛋白OMP的融合蛋白在預防雞傳染性法氏囊病以及沙門菌感染中的用途。本發明屬于醫學或獸醫學技術領域。

背景技術

雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的能夠引起雞體免疫抑制的重要的病毒病，嚴重危害著世界的養雞業。傳統疫苗在防治該病的歷史中起到非常重要的作用，隨著該病近年來呈現的新的變化-血清型變異株，超強毒株的出現，使得對該病的防治越來越棘手，傳統疫苗的研制速度已經有些難于跟上該病的變化。快速的開發新型有效的能防治變異和超強毒株的新型疫苗的要求尤為迫切。重組乳酸菌活載體基因工程疫苗是完全食品級安全的、無任何生物安全隱患的新型活載體疫苗。不僅保留病毒抗原性，更不存在散毒的危險。該疫苗的開發和應用將為防治當前流行的雞傳染性法氏囊病提供有效的工具和手段，并可為防治禽類免疫抑制病提供有效的參考和經驗。

乳酸菌(Lactic acid bacteria)是一類在代謝性能、生理特征及形態上不完全相同的革蘭氏陽性菌的統稱，其總的特征是發酵碳水化合物時主要代謝產物是乳酸， G+，多數為不形成芽孢的對動物或植物具有益生特性的一類細菌。早期被人們用于食品發酵并取得了巨大的成功。隨著對于益生乳酸菌的生理特性和分子遺傳特性基礎研究的深入，研究者們逐漸認識到乳酸菌作為遞送異源抗原的活載體用于各種疾病的預防與治療具有巨大的應用前景。特別是利用乳酸菌活載體疫苗不僅可以誘導機體產生系統性免疫應答，而且可以同時誘導機體的黏膜免疫應答。

伴隨著分子生物學和基因工程技術的發展，出現了對于雞傳染性法氏囊病的一些新型的疫苗研究，其中主要有DNA疫苗、重組亞單位疫苗、基因工程活載體疫苗。其中活載體疫苗是指將致病微生物的主要抗原蛋白基因片段插入到表達載體中，然后將重組載體轉到原核微生物或者細胞雞真核微生物而得到的產物；或者是剔除致病微生非復制必須的毒力基因得到的基因缺失疫苗。目前主要是利用一些病毒載體(如：馬立克病毒(MDV)、雞痘病毒(FPV)、新城疫病毒(NDV)及禽腺病毒(ALV))表達IBDV的主要抗原蛋白VP2構建病毒活載體疫苗，其中Tsukamoto 等利用HVT作為載體構建的rHVTpec-VP2重組活載體疫苗，在免疫雞后，分別取得了致死劑量vvIBDV的攻毒保護率100％；隨后Bublot團隊和Le Gros團隊分別開發的rHVT-VP2活載體疫苗在1日齡免疫接種雛雞后，也取得了良好的免疫效果。目前利用乳酸菌構建重組乳酸菌IBDV-VP2活載體疫苗的研究預期取得了初步的進展，但是效果并不是非常理想，還需要進一步的探索和研究。