[發(fā)明專利]遼東櫟的SSR分子標(biāo)記引物和鑒定遼東櫟品種的方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710274358.7
• 申請(qǐng)日: 2017-04-25
• 公開（公告）號(hào): CN107419003A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭斌;楊欣超;王建義;馬佳琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西省林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京智為時(shí)代知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11498
• 代理人: 王加嶺,楊靜

1.一種遼東櫟的SSR分子標(biāo)記引物，其特征在于，所述引物包括ssrQrZAG 96、ssrQrZAG 7、Qden 03011及Qden 05031，各引物所對(duì)應(yīng)的序列為：

ssrQrZAG 96正向：ACATCATCAACTATGCCGAACA

反向：GGTTGGGAAAAGGAGATCAGA；

ssrQrZAG 7正向：CAACTTGGTGTTCGGATCAA

反向：GTGCATTTCTTTTATAGCATTCAC；

Qden 03011正向：AACCC AACCTTCCCTTCATC

反向：GCAGTGGTGCCTAATGTAGAC；

Qden 05031正向：CCCCGATTCGCCATCATTGT

反向：GTAACGCCGTTTTTCTCCACC。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SSR分子標(biāo)記引物，其特征在于，所述引物的退火溫度都為58℃。

3.一種利用SSR分子標(biāo)記引物鑒定遼東櫟品種的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

提取供試遼東櫟品種樣品的DNA；

利用如權(quán)利要求1所述的SSR分子標(biāo)記引物對(duì)遼東櫟品種樣品的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體積為20μL，擴(kuò)增反應(yīng)體系為：LA TaqDNA Polymerase(5U/μL)0.2μL、10×PCR mix 2.0μL、反向引物(10pmol/μL)0.4μL、正向引物(10pmol/μL)0.2μL、M13+正向引物0.2μL、DNA模板(<1μg)1.0μL和ddH2O 16.0；熱循環(huán)條件如下：反應(yīng)先在94℃預(yù)變性5min,然后在94℃變性20s、58℃復(fù)性20s、72℃延伸20s條件下進(jìn)行30輪循環(huán)，最后在72℃延伸5min，4℃保存；

將上述PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析。

4.一種權(quán)利要求3所述方法的應(yīng)用，其特征在于，通過4對(duì)SSR分子標(biāo)記引物PCR擴(kuò)增后進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析，對(duì)供試遼東櫟品種與已知遼東櫟品種進(jìn)行鑒定。