[發(fā)明專利]一種快速的檢測癌胚抗原的比色分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710270546.2
• 申請日: 2017-04-24
• 公開（公告）號: CN107121549B
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁傳敏;張冰;王雪;常宏宏;李興;高文超
• 申請（專利權(quán)）人: 太原理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N21/78
• 代理公司: 太原市科瑞達(dá)專利代理有限公司 14101
• 代理人: 李富元

1.一種比色分析的快速的檢測癌胚抗原的免疫傳感器，其特征在于：按照如下的步驟進(jìn)行

步驟一、制備Ag₃PO₄/Ag納米復(fù)合材料并將其修飾癌胚抗原抗體，將硝酸銀和乙二醇溶液混合均勻形成第一溶液，將Na₂HPO₄·12H₂O 和乙二醇溶液混合均勻形成第二溶液，將第一溶液和第二溶液混合均勻后攪拌1-3小時(shí)形成第三溶液，第三溶液在160°C 油浴條件下攪拌30分鐘，通過離心和清洗，得到Ag₃PO₄/Ag 納米球分散液，將CEA抗體加入到Ag₃PO₄/Ag納米球分散液中，在4 °C下孵育8-12小時(shí)，磁性分離并清洗得到抗體標(biāo)記的Ag₃PO₄/Ag 結(jié)合物即Ab₂-Ag₃PO₄/Ag納米球分散液；

步驟二、制備Fe₃O₄/Ag納米復(fù)合材料并將其修飾癌胚抗原抗體，將四氧化三鐵和多巴胺加入到二次水中混合均勻，再將硝酸銀加入到該混合溶液中，攪拌5-7小時(shí)，通過磁性分離得到沉淀物，經(jīng)清洗后得到Fe₃O₄@Ag 納米球分散液，將CEA抗體加入到Fe₃O₄@Ag 納米球分散液中，在4 °C下孵育8-12小時(shí)，磁性分離并清洗得到抗體標(biāo)記的Fe₃O₄@Ag 結(jié)合物即Fe₃O₄@Ag-Ab₁納米球分散液；

步驟三、將Fe₃O₄@Ag-Ab₁納米球分散液依次孵育不同濃度的癌胚抗原CEA 30分鐘，然后用水清洗2-5次，再用Ab₂-Ag₃PO₄/Ag納米球分散液孵育30分鐘，構(gòu)建成免疫傳感器，加入ABS緩沖液和四甲基聯(lián)苯胺TMB溶液，通過紫外分光光度計(jì)檢測TMB的紫外吸收來定量CEA的濃度，通過紫外分光光度計(jì)檢測TMB的紫外吸收來定量CEA的濃度是指，根據(jù)CEA濃度與吸光度成線性相關(guān)性建立對應(yīng)的線性方程為y=0.297 x + 0.176，x是CEA的濃度，單位是納克/毫升，y是檢測的吸光度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種比色分析的快速的檢測癌胚抗原的免疫傳感器，其特征在于：步驟一中，第一溶液中硝酸銀的量為1-1.8a毫克，乙二醇的量為20-36a毫升，濃度為0.1毫摩爾/升；第二溶液中Na₂HPO₄·12H₂O的量為20-36a毫升，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 %，乙二醇的量為20-36a毫升，濃度為0.1毫摩爾/升；CEA抗體的量為20-36a毫升，濃度為0.1毫摩爾/升；步驟二中四氧化三鐵的量為1-1.8a毫克；多巴胺的量為15-27a毫克；二次水的量為8-10a毫升；硝酸銀的量為11-20a毫克；CEA抗體的量為500-900a微升，濃度為1毫克/毫升；a為正整數(shù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種比色分析的快速的檢測癌胚抗原的免疫傳感器，其特征在于：步驟三中，依次孵育不同濃度的癌胚抗原CEA 30分鐘是指依次在濃度為2.5納克/毫升、2納克/毫升、1.5納克/毫升、1納克/毫升、0.8納克/毫升、0.5納克/毫升、0.2納克/毫升的癌胚抗原CEA中在室溫下孵育30 分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種比色分析的快速的檢測癌胚抗原的免疫傳感器，其特征在于：步驟三中，F(xiàn)e₃O₄@Ag-Ab₁的量為1-1.8b毫升，Ab₂-Ag₃PO₄/Ag的量為1-1.8b毫升；ABS緩沖液的量為2-3.6b毫升，pH為3；TMB的量為100-180b微升，濃度為5毫摩爾/升，b為正整數(shù)。