技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)檢測領(lǐng)域，尤其是一種RP-HPLC測定兩面針中藥牙膏中毛兩面針?biāo)睾康姆椒ā?/p>

背景技術(shù)

兩面針，為蕓香科植物兩面針Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.的干燥根,可活血化瘀，行氣止痛，祛風(fēng)通絡(luò)，解毒消腫，不能過量服用^[1]，毛兩面針為其變種^[2]，兩面針?biāo)幉脑诨瘜W(xué)成分及含量上均有別于毛兩面針。毛兩面針?biāo)赜置w龍掌血內(nèi)酯，為毛兩面針及飛龍掌血根特有成分；氯化兩面針堿為兩面針主要效用成分之一；存在于藥材兩面針、毛兩面針及飛龍掌血中，但在三者中含量有所不同^[3-5]。《中國藥典》2015版一部兩面針的檢查項(xiàng)下明確規(guī)定不得檢出毛兩面針?biāo)亍?/p>

兩面針中藥牙膏是添加中藥兩面針提取物作為日常維護(hù)口腔健康的中藥牙膏，具有消炎止血，鎮(zhèn)痛抗菌，清熱降火的功效^[6]。用于牙齦出血，牙齦腫痛。

毛兩面針?biāo)卦趦擅驷樠栏嘀械暮烤o緊關(guān)聯(lián)著兩面針牙膏的質(zhì)量和有效性，有研究發(fā)現(xiàn)藥材市場上主流藥材并非藥典所規(guī)定品種，而以毛兩面針為主，可能出現(xiàn)用毛兩面針?biāo)幉奶娲鷥擅驷樛读系那闆r^[3]。盡管目前有研究發(fā)現(xiàn)對毛兩面針?biāo)睾繕O高的飛龍掌血藥材和毛兩面針?biāo)貙φ掌愤M(jìn)行急性毒性評價，未觀察到毒性反應(yīng)^[7]，但目前并沒有研究表明毛兩面針或飛龍掌血可替代兩面針投料，為了保證添加功效成分來源的純正性，兩面針中藥牙膏仍應(yīng)不得檢出毛兩面針?biāo)亍Ｄ壳皩擅驷樇懊珒擅驷標(biāo)幉闹饕煞值暮繙y定^[3]與牙膏中有效成分的含量測定^[4]已有相關(guān)研究報道，但尚未見有對兩面針牙膏中毛兩面針?biāo)氐暮繙y定方法進(jìn)行報道。

由藥典^[1]可知，兩面針的檢查項(xiàng)下明確規(guī)定不得檢出毛兩面針?biāo)兀诒緦?shí)驗(yàn)三批樣品中毛兩面針?biāo)睾康慕Y(jié)果(見表6)發(fā)現(xiàn)其中一批樣品中檢出微量的毛兩面針?biāo)兀瑸椴缓细駱悠贰Ｆ溆鄡膳煌瑯悠方詾樘砑恿藘擅驷樚崛∥锏闹兴幯栏啵诤繙y定項(xiàng)下的結(jié)果顯示未檢出毛兩面針?biāo)兀蚩赡転椴缓珒擅驷標(biāo)鼗蛎珒擅驷標(biāo)睾繕O微并低于檢出限。

目前，兩面針的質(zhì)量控制指標(biāo)尚未完善，在制備兩面針中藥牙膏時選用的兩面針?biāo)幉牡馁|(zhì)量會有所差別，但兩面針牙膏配方工藝嚴(yán)格保密，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也未見有相關(guān)的報道，所以在原料藥兩面針的選取上也會對兩面針牙膏中兩面針功效成分的含量及真?zhèn)卧斐捎绊憽?/p>

因此建立反相高效液相色譜法測定兩面針中藥牙膏中毛兩面針?biāo)氐暮繉刂圃撗栏嗟馁|(zhì)量和保證其日常使用的有效性、安全性有著重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述不足，本發(fā)明旨在提供一種RP-HPLC測定兩面針中藥牙膏中毛兩面針?biāo)睾康姆椒ǎ摲椒ň哂胁僮骱啽恪⒀杆佟?zhǔn)確、干擾少、精密度與重復(fù)性較好等優(yōu)點(diǎn)，可為測定兩面針中藥牙膏中毛兩面針?biāo)氐暮刻峁?shí)驗(yàn)依據(jù)。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種RP-HPLC測定兩面針中藥牙膏中毛兩面針?biāo)睾康姆椒ǎ来伟ㄏ率霾襟E：

步驟1：采用甲醇提取兩面針牙膏中的毛兩面針，并收集甲醇提取液；

步驟2：采用RP-HPLC法測定甲醇提取液中毛兩面針的含量。

優(yōu)選地，所述的步驟1具體包括下述步驟：

步驟S1：稱取兩面針牙膏2g，與20ml濃度為80％的甲醇混合，稱定重量M1；

步驟S2：攪拌30min，稱定重量，并用濃度為80％的甲醇補(bǔ)足至M1；

步驟S3：超聲30min，冷卻，稱定重量，并用濃度為80％的甲醇補(bǔ)足至M1，離心，冷藏靜置10min；

步驟S4：取上清液1.5-2mL，離心5min，過濾，即得。

優(yōu)選地，步驟S3所述的超聲處理的參數(shù)為100W、80Hz。

優(yōu)選地，步驟S3所述的離心參數(shù)為：4000r/min，5min。

優(yōu)選地，步驟S4所述的離心參數(shù)為：15000r/min，5min。

優(yōu)選地，步驟S4所述的過濾具體為：用0.22μm微孔濾膜過濾。

優(yōu)選地，步驟2所述的RP-HPLC的檢測參數(shù)為：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18；流動相為0.1％甲酸水溶液-乙腈；流速為1.0mL/min；進(jìn)樣量為1μl；柱溫為35℃；檢測波長為328nm。

優(yōu)選地，所述的色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。

優(yōu)選地，所述的流動相為體積比等于6：4的0.1％甲酸水溶液-乙腈。