[發(fā)明專利]一種HOCs的被動加標方法及其在效應(yīng)導(dǎo)向分析中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710244276.8
• 申請日: 2017-04-14
• 公開（公告）號: CN106970171B
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李慧珍;游靜;祁紅學(xué)
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.一種HOCs的被動加標方法及其在效應(yīng)導(dǎo)向分析中的應(yīng)用，其特征在于包括以下步驟：

步驟一，PDMS膜的制備，

第一步，將硅酮前聚物和固化劑充分混合，以一定厚度均勻涂布在干凈的不銹鋼板上，涂布厚度為0.1～0.5mm，去除其中氣泡，保持710mm汞柱30～40min；

第二步，23～25℃固化72～96h后，將膜揭下，裁剪成一定大小的片狀；

第三步，用丙酮超聲3～4次去除雜質(zhì)，超聲時間為15～30min；

第四步，用純凈水超聲3～4次去除丙酮，自然風干，得到PDMS膜，所得PDMS膜的密度為1.15～1.20g/ml；

步驟二，被動加標載樣，

第一步，取步驟一制備的空白PDMS膜浸泡于含有目標HOCs的甲醇溶液，在23～25℃水平搖動，控制水平搖動速率為200～220rpm，每隔一段時間加入純凈水，至少加8次，促使HOCs轉(zhuǎn)移到PDMS膜中，至48～72h完成載樣；

第二步，取出PDMS膜，用純凈水洗凈甲醇，在23～25℃自然風干，得到載樣PDMS膜；

步驟三，效應(yīng)導(dǎo)向分析，

第一步，沉積物中有機污染物的提取，

根據(jù)沉積物中有機碳含量來計算所需沉積物的提取量，沉積物用量為3～4倍PDMS量的有機碳等量提取物，并用正己烷和丙酮混合液提?。怀练e物樣品冷凍干燥后，研磨過篩，稱取一定量的干沉積物，加入100～150ml體積比為1：1的正己烷和丙酮混合液，溶劑萃取沉積物中的有機污染物，氮吹濃縮并置換溶劑為二氯甲烷；

第二步，凝膠滲透色譜分離、被動加標和毒性測試，

采用GPC，色譜柱為S-X3，流動相為二氯甲烷，流速為5～8ml/min；按時間收集4～6個組分，氮氣濃縮并置換溶劑為1ml甲醇；按照步驟二所述被動加標載樣方法，將GPC分離得到的各個組分分別載入PDMS膜，得到載樣PDMS膜，用于水體生物毒性測試；

生物毒性測試體系為400ml玻璃燒杯，加入300～350ml中等硬水、10～15g干凈細砂平鋪于燒杯底部、一片載樣PDMS膜懸浮于水中，蓋上錫紙避光，磁力攪拌，促使PDMS中有機污染物釋放進入水體并達到平衡；攪拌完后，取下錫紙，加入受試水生生物，開始靜置的毒性實驗；實驗期間每天監(jiān)測電導(dǎo)率、pH、溶氧和溫度水質(zhì)參數(shù)，并觀察記錄其存活情況和行為變化；暴露結(jié)束后，篩出存活的生物，記錄致死性，并將存活的生物保存于-80℃，用于酶活性生化指標測定；對毒性測試表現(xiàn)出致毒效應(yīng)的組分，進一步利用反相色譜柱分離；

第三步，反相色譜柱分離、被動加標和毒性測試，

合并第二步中對模式生物表現(xiàn)出毒性的組分，進行C18反相柱的分離，流動相為甲醇和水，全組分分組收集，經(jīng)正己烷反萃取后，溶劑濃縮轉(zhuǎn)換為甲醇；通過被動加標，將各個組分加載入PDMS膜，根據(jù)第二步所述的被動加標和生物毒性測試方法進行生物毒性測試；

第四步，毒性組分中有機污染物的定性與定量分析，

對于上述經(jīng)反相色譜柱分離后表現(xiàn)出生物毒性的組分，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中未知污染物專用篩查軟件進行定性和半定量分析；根據(jù)濃度與組分毒性之間的相關(guān)性，并結(jié)合反相色譜柱洗脫時間信息，篩選可能的致毒物質(zhì)；對于篩查難度大的組分，可重復(fù)進行第三步的分離、被動加標和毒性測試過程，不斷縮小致毒組分的范圍，直至獲得可篩查毒性組分，進行定性定量分析；

第五步，毒性確認，

通過化學(xué)鑒定和毒性確認途徑，對第四步篩選獲得的致毒物質(zhì)進行確定；化學(xué)鑒定通過毒性組分初篩的污染物需要標準品的核實，通過進一步的儀器分析驗證，方能確認；毒性確認采用劑量-效應(yīng)曲線法，通過可疑貢獻化合物標準品的劑量-效應(yīng)曲線，計算組分中污染物相應(yīng)濃度的理論毒性，根據(jù)其在組分總體毒性的貢獻確定其是否為主要致毒物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HOCs的被動加標方法及其在效應(yīng)導(dǎo)向分析中的應(yīng)用，其特征在于：所述硅酮前聚物由硅氧烷聚合物和催化劑組成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HOCs的被動加標方法及其在效應(yīng)導(dǎo)向分析中的應(yīng)用，其特征在于：所述加水間隔時間為2～8h，其間隔時間設(shè)置方法為開始時加水間隔時間短，臨近結(jié)束時加水間隔時間長。