[發明專利]枯草桿菌酶變體和編碼它們的多核苷酸

在審

• 申請號: 201710232570.7
• 申請日: 2012-12-18
• 公開（公告）號: CN107267489A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: W.貝森馬特;A.本尼;E.P.弗里斯;P.O.米奇爾森
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/54
• 分類號: C12N9/54;C11D3/386
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所11105
• 代理人: 張文輝,易方方

1.一種用于獲得一種蛋白酶變體的方法，該方法包括在親本枯草桿菌酶的與具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的位置53、54、55、56以及57相對應的一個或多個位置引入缺失，其中該變體具有與SEQ ID NO:2至少65％一致的氨基酸序列；并且回收該變體。

2.如權利要求1所述的方法，其中該變體包含與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、54、55、56或57相對應的兩個、三個、四個或五個缺失。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中通過一種方法獲得該蛋白酶變體，該方法包括在親本枯草桿菌酶的與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、54、55、56或57相對應的環中引入一個或多個選自下組的氨基酸的缺失，該組由Ser、Glu、Thr、Asn或Pro組成，其中該變體與SEQ ID NO 2具有至少65％的一致性。

4.如權利要求1所述的方法，其中通過一種方法獲得該蛋白酶變體，該方法包括在親本枯草桿菌酶的與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置55、56或57相對應的環中引入一個或多個氨基酸的缺失。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中該蛋白酶變體與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽具有至少70％，例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或者至少99％、但小于100％的序列一致性。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中該親本枯草桿菌酶是選自下組，該組由以下各項組成：

(a)與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽具有至少65％的序列一致性的一種多肽；

(b)由在中嚴謹度或高嚴謹度條件下與(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽編碼序列、(ii)編碼具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的一種序列、或者(iii)(i)或(ii)的全長互補體雜交的一種多核苷酸編碼的一種多肽；

(c)由與SEQ ID NO:1的成熟多肽編碼序列或者編碼具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的一種序列具有至少70％一致性的一種多核苷酸編碼的一種多肽；以及

(d)具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的一個片段，該片段具有蛋白酶活性。

7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中該親本枯草桿菌酶與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽具有至少65％，例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性。

8.一種蛋白酶變體，該蛋白酶變體在與具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的位置53、54、55、56或57相對應的環中包含一個或多個氨基酸的缺失并且在與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、54、55、56或57相對應的位置進一步包含一個或多個取代，其中

(a)該變體與SEQ ID NO:2具有至少65％且小于100％的序列一致性，并且

(b)該變體具有蛋白酶活性。

9.如權利要求8所述的變體，其中該變體在與SEQ ID NO:2的位置53相對應的一個位置包含一個缺失并且在與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置54、55、56或57相對應的一個或多個位置進一步包含取代，和/或

其中該變體在與SEQ ID NO:2的位置54相對應的一個位置包含一個缺失并且在與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、55、56或57相對應的一個或多個位置進一步包含取代，和/或

其中該變體在與SEQ ID NO:2的位置55相對應的一個位置包含一個缺失并且在與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、54、56或57相對應的一個或多個位置進一步包含取代，和/或

其中該變體在與SEQ ID NO:2的位置56相對應的一個位置包含一個缺失并且在與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、54、55或57相對應的一個或多個位置進一步包含取代，或者

其中該變體在與SEQ ID NO:2的位置57相對應的一個位置包含一個缺失并且在與具有SEQ ID NO:2的該成熟多肽的位置53、54、55或56相對應的一個或多個位置進一步包含取代。