[發明專利]一種釀酒葡萄組培苗快速繁殖的方法

在審

• 申請號: 201710231766.4
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107018898A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 史星雲;羅祥;劉偉;牟德生;王長永;王多文;李強;張明秀;銀玉萍;張軍;何彩;金娜;郭艷蘭
• 申請（專利權）人: 武威市林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及組織培養技術領域，具體涉及一種釀酒葡萄組培苗快速繁殖的方法。

背景技術

葡萄良種苗木繁育體系建設，是我國當前葡萄產業中的突出問題。長期以來，葡萄苗木生產、銷售和運輸缺乏管理部門的有效監督，加之利益的驅使，導致苗木質量參差不齊，尤其是品種純正、高質量、脫毒良種苗木生產缺乏統一標準。近年來，植物的組織培養廣泛應用在釀酒葡萄快速繁殖中，通過組織培養，不僅可以加快繁殖速度，而且還可以有效地去除病毒，獲得無病毒苗木。同時，釀酒葡萄外植體類型、培養基、溫度與濕度、光照強度以及接種操作等內外因素都會影響組培苗的生長和繁殖速度；另外，在實際生產中，不同釀酒葡萄品種需要不同培養基來進行培養。因此，有必要針對不同釀酒葡萄品種篩選最適宜的培養條件，降低操作難度，建立釀酒葡萄組培快繁體系，為生產快速提供優質苗木。

發明內容

針對釀酒葡萄組培苗生產過程中，不同品種需要不同培養基配方、培養周期長、根系弱和操作難度等問題，本發明提供了一種釀酒葡萄組培苗快速繁殖的方法，可實現同時增殖多個品種、縮短培養周期、高效率的組培快繁，為生產提供優質葡萄苗木。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種釀酒葡萄組培苗快速繁殖的方法，包括如下步驟：

S1、按培養基配方分別配制50倍大量元素母液，100倍微量元素、鐵鹽、有機物、IAA和青霉素母液，其中鈣鹽與大量元素母液分開配制，并貼上標簽，冷藏保存待用；

S2、在搪瓷盆中分別加入75g蔗糖、23g瓊脂，然后再加入蒸餾水4L，加熱至沸騰，期間不斷攪拌；

S3、加入母液至搪瓷盆中，充分混合均勻，煮沸3分～5分鐘后，加蒸餾水定容至5L，然后用1.0mol/L的HCl或者1.0mol/L的NaOH溶液調節pH值至5.8；

S4、將制作好的培養基均勻的分裝到200ml的組培瓶中、擰緊封口蓋或者150ml的三角瓶中、加棉塞、牛皮紙包裹、用棉線繩扎緊；然后放在高壓滅菌鍋內滅菌，條件為121℃，20分鐘；取出放在推車中待用；

S5、在無菌接種室內，選用無菌培養的成株無毒苗，剪取莖段，要求莖段帶有一個芽，莖段下部不能少于0.5cm，莖段上帶有1～2片完整葉片，接種在上述培養基上，每瓶3～5個莖段；培養溫度為25～28℃，濕度85％以上，光照強度為2500～3500lux，光源為LED燈，光照培養16小時，黑暗培養8小時。

本發明具有以下有益效果；

(1)可實現同時增殖多個品種，包括赤霞珠、梅鹿輒、霞多麗和黑比諾等品種；

(2)培養周期短，經過20～30天的培養，即可進行馴化移栽。

(3)根系發達，培養第30天時，組培苗根系多、粗壯，且有較多須根，有利于馴化移栽，提高成活率。

具體實施方式

為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

實施例1(以黑比諾為例)：

步驟一、培養基的選擇：

B5+4.6g/L瓊脂+15g/L蔗糖+0.1mg/L IAA+50mg/L青霉素，pH＝5.8。

步驟二、培養基的具體制作步驟(以5L培養基熬制為例)：

(1)母液的配制，按培養基配方分別配制50倍大量元素母液，100倍微量元素、鐵鹽、有機物、IAA和青霉素母液，其中鈣鹽與大量元素母液分開配制，并貼上標簽，冷藏保存待用。

(2)培養基的熬制，分別在搪瓷盆中加入75g蔗糖、23g瓊脂，然后再加入蒸餾水4L，加熱至沸騰，期間不斷攪拌；再分別加入大量元素和鈣鹽母液各100ml，微量元素、鐵鹽、有機物、IAA和青霉素各50ml至搪瓷盆中，充分混合均勻，煮沸3分～5分鐘。

(4)加蒸餾水定容至5L，然后用1.0mol/L的HCl或者1.0mol/L的NaOH溶液調pH值至5.8。

(5)培養基分裝與滅菌，將制作好的培養基均勻的分裝到150ml的三角瓶中，每瓶50～60ml；加棉塞、牛皮紙包裹、用棉線繩扎緊；然后放在高壓滅菌鍋內滅菌，條件為121℃，20分鐘；冷卻后取出放在推車中待用。

步驟三、接種培養