[發明專利]一種細胞貼壁因子及其試劑和包被液

有效

• 申請號: 201710231001.0
• 申請日: 2017-04-11
• 公開（公告）號: CN107011416B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 顏學恒;張智培;薛宜青;蘇恩筠;熊延獅
• 申請（專利權）人: 上海逍鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N5/071;C12N5/0783;C12N5/0784;C12M3/00;C12M1/00
• 代理公司: 31307 上海遠同律師事務所
• 代理人: 張堅

本發明涉及一種細胞貼壁因子，以及采用該細胞貼壁因子的細胞貼壁試劑和包被液，以及采用該包被液處理后的細胞培養容器，以及它們在培養干細胞或T淋巴細胞方面的應用。本發明的細胞貼壁因子為為具有如SEQ No.1所示的氨基酸序列的化學合成多肽，一方面其具有多個ECM蛋白的功能區域，可以提供多種ECM蛋白的功能，可以使得細胞如同在原本的生長環境中貼壁生長，提高細胞的生長速度，另一方面，其化學成分明確，配方質量穩定，不使用細菌或真菌，不存在細菌或真菌碎片，可以避免殘留碎片或其他雜質對細胞生長的危害，安全性更高，可以安全地應用于臨床治療。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種細胞貼壁因子，以及采用該細胞貼壁因子的細胞貼壁試劑和包被液，以及采用該包被液處理后的細胞培養容器，以及它們在培養干細胞或T淋巴細胞方面的應用。

背景技術

高等生物細胞除了循環運輸類細胞以外，一般都是固定生長、必須貼附在基質上生長，此基質被稱為細胞外基質(Extracellular Matrix，ECM)。對于干細胞的體外培養來說，ECM的提供是必須的。

已知的ECM為多層網狀結構，主要包含膠原蛋白、彈性蛋白、蛋白多糖和糖蛋白等。細胞貼附到細胞外的間質糖蛋白上(類似纖維網蛋白)，以利細胞的生長、伸展與分化。血清是這些糖蛋白的豐富來源，但卻相當昂貴且難以分離，因此限制了細胞大量培養能力。在不加入血清的培養基中，通常需要另加入一些貼壁因子(也稱貼附因子)。

目前一些已知的貼壁因子，大多是以單一蛋白或多個不同蛋白混和物。通常來說，以多個不同蛋白的混合物作為貼壁因子的細胞生長效果較單一種蛋白的好，這背后的原因據推測可能是由于不同蛋白分別提供不同的功能區域，從而使細胞能更好的生長。

為了能夠大量生產這些蛋白(貼壁因子)，通常是利用細菌或是真菌的表達系統來制造，然而在純化提取的時候，常容易殘留細菌或是真菌的碎片，會造成一些不利于細胞生長的問題，特別是，當培養的細胞要應用于人體治療時，殘留的細菌碎片將對人體造成過敏反應，嚴重危害病人的生命安全。

因此，本領域希望能夠研發一種無細菌或無真菌殘留，化學成分明確的貼壁因子以及試劑。

發明內容

鑒于相關技術的上述問題和/或其他問題，本發明一方面提供了一種細胞貼壁因子，該細胞貼壁因子為具有如SEQ No.1所示的氨基酸序列的化學合成多肽。

本發明再一方面提供了一種細胞貼壁試劑，所述細胞貼壁試劑含有如上述的細胞貼壁因子。

優選的，所述細胞貼壁試劑為所述細胞貼壁因子與磷酸鹽緩沖液的混合液。

優選的，所述細胞貼壁試劑還含有丙三醇和藥用乙醇。

優選的，每毫升所述細胞貼壁試劑含有5-15mg所述細胞貼壁因子、100μl磷酸鹽緩沖液、100μl丙三醇和800μl藥用乙醇。

本發明還一方面提供了一種用于促進細胞貼壁的包被液，所述包被液含有上述的細胞貼壁因子，且所述細胞貼壁因子的濃度為5-15μg/ml；并且，所述包被液是通過將上述的細胞貼壁因子溶解于磷酸鹽緩沖液配制而成；或者，所述包被液是采用磷酸鹽緩沖液將上述的細胞貼壁試劑稀釋配制而成。

本發明還一方面一種細胞培養容器，所述細胞培養容器具有供細胞貼壁的內壁，所述內壁經過包被處理，所述包被處理采用如上述的用于促進細胞貼壁的包被液。

優選的，所述包被處理是將上述的用于促進細胞貼壁的包被液均勻地涂布于所述內壁，并在4～30攝氏度下包被1～6小時，最后棄去所述內壁上殘留的包被液。

本發明還一方面提供了上述的細胞貼壁因子、上述細胞貼壁試劑、上述的包被液以及上述的細胞培養容器在培養干細胞或免疫細胞方面的應用。

優選的，所述免疫細胞為淋巴細胞或樹突狀細胞。