[發明專利]一種抗新加坡石斑魚虹彩病毒的藥物篩選方法

在審

• 申請號: 201710228784.7
• 申請日: 2017-04-10
• 公開（公告）號: CN107794291A
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 易梅生;賈坤同
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種基于細胞活性分析的抗SGIV藥物篩選的細胞篩選體系，包括：血清濃度5％，當需要添加DMSO為溶劑時，DMSO濃度不高于1％，病毒感染復數為0.3，病毒感染時間為48h。

2.一種基于細胞活性分析的抗SGIV藥物篩選的細胞篩選體系的優化方法，包括以下步驟：

(1)定量SGIV感染引起CPE，確定感染復數及感染時間；

(2)基于CPE的細胞活性培養條件的優化。

3.一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，包括以下步驟：

(1)體外篩選細胞株的建立及細胞培養；

(2)病毒感染所述細胞株及細胞培養；

(3)被篩選藥物的添加及細胞培養；

(4)通過檢測細胞活性進行藥物篩選。

4.如權利要求3所述的一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，其特征在于：所述步驟(1)中的細胞株為魚類細胞株。

5.如權利要求4所述的一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，其特征在于：所述細胞株為斑馬魚胚胎細胞株ZEB，于2017年1月9日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為C201708。

6.如權利要求3所述的一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，其特征在于：所述步驟(1)、(2)、(3)的細胞培養使用的培養基為DMEM培養基，血清濃度5％，當需要添加DMSO為溶劑時，DMSO濃度不高于1％。

7.如權利要求3所述的一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，其特征在于：步驟(2)中所述病毒感染時病毒感染復數為0.3，病毒感染時間為48h。

8.如權利要求3-7任一所述的一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，其特征在于：所述藥物篩選方法還包括使用ddPCR對藥物篩選結果的檢測，使用ddPCR來檢測SGIV基因編碼的衣殼蛋白(MCP)復制數量來定量檢測篩選藥物的效果。

9.如權利要求8所述的一種基于所述細胞篩選體系的抗SGIV藥物篩選方法，其特征在于：使用ddPCR來檢測SGIV基因編碼的衣殼蛋白(MCP)復制數量的計算公式為：CNMCP＝countMCP/countactin＝MCP數量/肌動蛋白數量。