[發明專利]生產免疫細胞的方法及誘發產生免疫作用細胞的方法

有效

• 申請號: 200910149433.2
• 申請日: 2009-06-22
• 公開（公告）號: CN101928695A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 梁瑩
• 申請（專利權）人: 鑫品生醫科技股份有限公司;北京鑫諦合生醫科技有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

技術領域

本發明系有關于一種產生免疫細胞的方法，尤指用于產生抗皰疹病毒之免疫細胞的方法。

背景技術

1964年Achong與Barr等人首次在伯奇氏淋巴瘤病人細胞中分離并發現艾普斯坦-巴爾二氏病毒(Epstein-BarrVirus，EBV)，中文名稱為「人類皰疹病毒第四型」(Human?herpesvirus-4，HHV-4)，屬于皰疹病毒科線型雙股DNA病毒。

EBV像大多數的皰疹病毒一樣有兩種生活史：細胞裂解時期(Lytic?phase)和潛伏期(Latent?phase)。其中，細胞裂解時期多發生在上皮細胞，因為病毒會在細胞內大量復制，最后導致細胞破裂，釋出大量的病毒。而潛伏期多發生在B淋巴球，EBV藉由鑲嵌在B淋巴球的基因體中，以逃避免疫細胞的攻擊，同時也有機會造成淋巴球不正常增生而引起癌化與其它慢性感染癥狀，例如「伯奇氏淋巴瘤」、「胃腺癌」、「鼻咽癌」、「何杰金氏病」、「T淋巴瘤」、「淋巴球增生性疾病」、「艾滋病相關淋巴癌」與「移植后淋巴球增生疾病」。

從分子生物學及EBV結構研究發現，近100個病毒基因會在細胞復制的過程中被表現出來，然而只有10個基因會在被潛伏感染的B細胞(latently?infected?B?cells)表現出來，其中包含有兩種未轉譯RNA(例如EBV-encoded?RNA；EBER)、6種核蛋白(例如核蛋白-1(EBV?nuclear?antigen-1，EBNA1)及核蛋白-3c(EBV?nuclear?antigen-3c，EBNA3c)與兩種膜蛋白(包含潛伏性膜蛋白-1(latent?membrane?protein-1；LMP1)及潛伏性膜蛋白-2(latent?membrane?protein-2；LMP2))。在不同潛伏期的病毒會表現不同的蛋白質，這些病毒蛋白亦會在上述惡性腫瘤細胞中大量表現。

目前現行治療EBV相關感染疾病的治療上，除了外科手術與放射線治療外，有傳統的抗病毒藥物(例如acyclovir)與抗腫瘤用藥物，及新興的抗體藥物(例如Gp350vaccine；Rituximab)。然而前述藥物都無法突破血腦障壁(blood-brain?barrier；BBB)，亦即無法經由體循環(systemic?circulation)而到達腦部感染部位，此外，即使這類抗病毒藥物有效抑制EBV增生，但是病患往往無法負荷藥物所產生的副作用因而降低或停止用藥，以致于無法有效治療。

目前對于移植受者之皰疹病毒的感染主要是使用抗病毒試劑進行先行性治療或預防治療。然而，這些藥理學方式具有其限制，諸如藥物毒性、抗藥性的發生、不佳的口服生物可利用性(oral?bioavailability)以及低效力等問題。死亡率在即使已利用抗病毒試劑治療之情況下仍然偏高，特別是于療程中未盡早開始治療。此外，當病患長期使用這些試劑，對于抗病毒試劑的抗藥性會逐漸產生。

為克服前述傳統藥物所具有的缺點，具有專一性高、副作用低、不易產生抗藥性，以及可個體化等優點的免疫療法便應運而生。現有針對皰疹病毒感染疾病之免疫療法是使用以活病毒為基礎的皰疹病毒抗原來源(herpes?virus?antigen?sources?based?on?live?virus)、經皰疹病毒感染的細胞(herpes?virus-infected?cells)、皰疹病毒基因表現載體(hepresherpes?virus?gene?expression?vector)或者合成的皰疹病毒蛋白或肽，藉以活化對皰疹病毒有專一性免疫反應的抗原呈現細胞(antigen?presenting?cells)，希望藉由已活化的抗原呈現細胞可以在活體外(ex?vivo)或活體內(in?vivo)刺激個體產生對EBV有專一性的毒殺型T細胞(CTL)及細胞免疫反應。實驗證實，在曾經感染EBV且有血清反應的人體(非急性感染)主要系藉由第一型主要組織兼容復體(MHC?class?I)的毒殺型T細胞控制EBV，故EBV專一毒殺型T細胞也經常可以從曾經感染過EBV個體的周邊血液中發現。此外，潛伏性膜蛋白1及潛伏性膜蛋白2抗原專一性的毒殺型T細胞在體外試驗中也已經被證實可以有效的毒殺藉由第一型主要組織兼容復體表現這兩種抗原細胞株。但是使用病毒或經病毒感染的細胞作為抗原來源，會有病毒污染以及導致感染的潛在風險；而使用全長皰疹病毒基因或蛋白質作為抗原來源則又有誘發免疫抑制作用(immune?suppression)或免疫耐受性(immune?tolerance)的問題。

發明內容