[發(fā)明專利]一種維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710216726.2
• 申請日: 2017-04-05
• 公開（公告）號: CN106916804A
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 閆磊;桂金秋;孫凱;梁軍;王妍;蔡克瑞;劉春玲;齊悅;晁岳剛;孫曉冬
• 申請（專利權(quán)）人: 牡丹江醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12P7/62
• 代理公司: 安徽信拓律師事務(wù)所34117
• 代理人: 婁爾玉

1.一種維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)共固定劑的制備：向泊洛沙姆中加入交聯(lián)聚維酮和六羥甲基三聚氰胺六甲醚，并以5℃/min的升溫速度升溫至70-75℃保溫混合15min，然后加入陰離子聚丙烯酰胺和環(huán)氧大豆油，繼續(xù)以5℃/min的升溫速度升溫至115-120℃保溫混合30min，所得混合物轉(zhuǎn)入5-10℃環(huán)境中密封靜置1h，并再次以5℃/min的升溫速度升溫至110-115℃保溫混合30min，再加入50-55℃水，充分混合后于50-55℃保溫靜置1h，過濾，所得濾渣送入冷凍干燥機(jī)中，干燥后所得固體經(jīng)超微粉碎機(jī)制成微粉，即得共固定劑；

(2)載體的制備：向水中加入陶瓷微粉、羥丙基甲基纖維素和葡萄糖酸鈉，以5℃/min的升溫速度升溫至回流狀態(tài)保溫混合15min，過濾，所得濾渣水洗三次，并將濾渣加入滾筒式混合機(jī)中；同時將納米二氧化鈦和納米膠粉加入乙醇中，以5℃/min的升溫速度升溫至回流狀態(tài)保溫混合30min，所得混合液以噴霧方式均勻噴向濾渣表面，然后自然冷卻至室溫，所得固體于40-45℃下真空干燥，最后于400-450℃下焙燒2h，即得載體；

(3)活化載體的制備：將上述所制載體和共固定劑于45-50℃下充分混合，靜置30min后加入水解聚馬來酸酐，混合均勻，即得活化載體；

(4)固定化脂肪酶的制備：將酵母類脂肪酶的水溶液按5000單位/克活化載體的比例與活化載體混合，于35℃下振蕩24h，振蕩過程中分3-5次加入過氧化氫脲，最后離心，經(jīng)室溫晾干后即得固定化脂肪酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中泊洛沙姆、交聯(lián)聚維酮、六羥甲基三聚氰胺六甲醚、陰離子聚丙烯酰胺、環(huán)氧大豆油和水的質(zhì)量比為15-20:5-10:0.5-1:3-5:0.5-1:50-100。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中水、陶瓷微粉、羥丙基甲基纖維素、葡萄糖酸鈉、納米二氧化鈦、納米膠粉和乙醇的質(zhì)量比為50-100:20-25:3-5:0.5-1:5-10:0.5-1:30-40。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中載體、共固定劑和水解聚馬來酸酐的質(zhì)量比為1:1:0.05。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)中酵母類脂肪酶的水溶液按10000單位/克過氧化氫脲的比例加入過氧化氫脲。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中泊洛沙姆使用前經(jīng)過預(yù)處理，其具體預(yù)處理方法為：向泊洛沙姆中加入乳酸和田菁粉，充分混合后于微波頻率2450MHz、輸出功率700W下微波處理5min，室溫靜置30min后再次微波處理5min，再加入30-35℃水，攪拌30min后送入噴霧干燥機(jī)中，干燥所得顆粒經(jīng)超微粉碎機(jī)制成微粉。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述泊洛沙姆、乳酸、田菁粉和水的質(zhì)量比為15-20:0.5-1:0.1-0.2:50-100。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中納米二氧化鈦是由二氧化鈦經(jīng)改性后制成的納米粉體，其制備方法為：向二氧化鈦中加入聚氧化乙烯和N-羥甲基丙烯酰胺，先以5℃/min的升溫速度升溫至120-125℃保溫混合30min，再加入萜烯樹脂和聚二甲基二烯丙基氯化銨，繼續(xù)在120-125℃下保溫混合30min，所得混合物以5℃/min的降溫速度降溫至45-50℃，并加入45-50℃水，再以10℃/min的升溫速度升溫至回流狀態(tài)保溫混合10min，經(jīng)自然冷卻至45-50℃后靜置1h，過濾，所得固體于75-80℃下烘干，最后送入納米研磨機(jī)中，經(jīng)研磨得到納米二氧化鈦。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的維生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于：所述二氧化鈦、聚氧化乙烯、N-羥甲基丙烯酰胺、萜烯樹脂、聚二甲基二烯丙基氯化銨和水的質(zhì)量比為30-40:3-5:0.5-1:2-3:0.1-0.3:100-150。