[發(fā)明專利]一種水溶液中膽紅素濃度的定量測定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710211310.1
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN106841078A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉海清;李娟娟;李建東
• 申請（專利權(quán)）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 上?？坡蓪＠硎聞?wù)所(特殊普通合伙)31290
• 代理人: 袁亞軍,金碎平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種水溶液中膽紅素濃度的定量測定方法，屬于分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

膽紅素是人體內(nèi)衰老的紅細胞中血紅素的正常代謝產(chǎn)物，為紅褐色的色素體，不溶于水，難溶于醇、醚、易溶于堿。它是臨床醫(yī)學試驗中常規(guī)檢驗項目之一，對肝膽疾病及溶血性疾病的診斷有著重要的意義。當膽紅素的某一個或幾個代謝環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙時，導致血清總膽紅素濃度超過正常水平，出現(xiàn)高膽紅素血癥(黃疸)，尤其在新生嬰兒中，游離膽紅素能透過血腦屏障，進一步引起各種組織的細胞尤其是大腦細胞死亡，導致智障、腦癱甚至是死亡；同時造成肝或膽管功能紊亂，加重肝損傷，尤其是肝炎病人。

膽紅素的檢測和清除是治療膽紅素相關(guān)疾病的重要手段。采用吸附劑進行血液體外灌注是去除膽紅素的臨床方法?；A(chǔ)研究中，為了解決膽紅素不溶于水溶液，通用的方法是先用少量0.1N NaOH溶液溶解，再用磷酸鹽緩沖液(pH＝7.2～7.4)或蒸餾水稀釋，配制膽紅素溶液，然后用于膽紅素與吸附劑的相互作用研究。但是該方法的最大的缺點是在堿的作用下，水不溶的膽紅素轉(zhuǎn)變成了水溶的膽紅素鈉。由于膽紅素和膽紅素鈉具有明顯不同的化學結(jié)構(gòu)和官能團，導致其與同一種吸附劑的相互作用機制和吸附能力將出現(xiàn)明顯差異。同時這種方法所配置的較高濃度膽紅素溶液體系不穩(wěn)定，靜置一段時間后，膽紅素易從溶液中析出。因此，從這種方法配置的膽紅素溶液中難以準確測定膽紅素的濃度，也不能真實反映膽紅素在吸附劑上的吸附能力，研究結(jié)果存在明顯偏差。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種水溶液中膽紅素濃度的定量測定方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供一種水溶液中膽紅素濃度的定量測定方法，其包括如下步驟：

S1：制備膽紅素溶液，并制作膽紅素溶液濃度與吸光度關(guān)系的工作曲線；

S2：將吸附劑加入所述膽紅素溶液中，在避光條件下進行吸附后，取上層清液測量吸光度，計算吸附劑的對膽紅素的吸附率與吸附量；

膽紅素不溶于水，醇、醚，易溶于堿，所以人們常用堿性水溶液來配置膽紅素溶液。但在堿性水溶液的作用下，水不溶的膽紅素轉(zhuǎn)變成了水溶的膽紅素鈉，由于膽紅素和膽紅素鈉具有明顯不同的化學結(jié)構(gòu)和官能團，導致其與吸附劑的相互作用機制和吸附能力將出現(xiàn)明顯差異。而膽紅素能夠溶于二甲亞砜等有機溶劑中，故選用二甲亞砜作為溶劑來溶解膽紅素。我們發(fā)現(xiàn)二甲亞砜單一溶劑配置出來的膽紅素溶液，并不能被殼聚糖或活性炭等吸附劑所吸附，但是加入一定體積的水之后，吸附劑對于膽紅素的吸附能力大大提高。而且水所占的體積不同，吸附效果也不同。所以本發(fā)明提供一種水溶液中膽紅素濃度的定量測定方法具體為：

在避光條件下，將膽紅素在有機溶劑中先進行初溶后，再加入有機溶劑和水的混合液進行稀釋，得到所述膽紅素溶液，并記錄膽紅素溶液的濃度。

通過一系列實驗，我們探索出了步驟S1中所述的用來初溶的有機溶劑的體積優(yōu)選為2～30mL，所述有機溶劑和水的混合液中，有機溶劑和水的體積比優(yōu)選為1:1～4:1。

作為優(yōu)選方案，所述有機溶劑和水的混合液中，有機溶劑和水的體積比最佳為2.5:1。

作為優(yōu)選方案，步驟S1中所述的有機溶劑為二甲亞砜。

作為優(yōu)選方案，步驟S2中，吸附是在4～40℃、振蕩的條件下進行的。

作為優(yōu)選方案，所述吸附的最佳溫度為37℃。

作為優(yōu)選方案，步驟S2中所述的吸附劑為殼聚糖或活性炭。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：

為了準確檢測水溶液中膽紅素的濃度以及水溶液中吸附劑對膽紅素的吸附能力，如何配置穩(wěn)定的膽紅素水溶液體系是首要問題；本發(fā)明的核心內(nèi)容是找到了一種新的含水溶劑體系，在不改變膽紅素的化學結(jié)構(gòu)的前提下溶解膽紅素，并測定它與吸附劑的相互作用，從而為水溶液中膽紅素濃度的測定提供一種新方法。

附圖說明

通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將會變得更明顯：

圖1為本發(fā)明實施例1中繪制的膽紅素濃度-吸光度工作曲線；

圖2為膽紅素在二甲亞砜/水溶液中吸光度隨時間變化的曲線；

圖3為膽紅素二甲亞砜/水溶液和膽紅素氫氧化鈉水溶液分別靜置一小時后的表觀對比；

圖4為膽紅素溶于NaOH/D₂O時的¹H-NMR譜圖；