[發明專利]基于高濃度鹽溶液下金納米的聚沉構建的化學生物傳感器、制備方法及應用

有效

• 申請號: 201710207144.8
• 申請日: 2017-03-31
• 公開（公告）號: CN106885805B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 王廣鳳;史東敏
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

1.基于高濃度鹽溶液下金納米的聚沉構建的化學生物傳感器的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

1)、將抗生素蛋白avidin溶液和biotin-ssDNA溶液混合在PBS緩沖液中，培養，使avidin與biotin-ssDNA結合，對DNA單鏈起保護作用；

2)將Exo I剪切酶加入步驟1)培養后的溶液中，加熱反應，然后冷卻至室溫；

3)室溫下，將AuNPs加入步驟2)得到的冷卻后的反應液中反應，最后加入NaCl溶液，利用AuNPs在高鹽濃度下發生聚沉而使溶液顏色變化，制備得到化學生物傳感器；

步驟1)中biotin-ssDNA序列為

5-CCCTCTATCTATCTCTCTCTCTCTCACTTA-biotin-3。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述培養具體為：在30～37℃下反應20-30min。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟1)具體為：將30μL 1μM的抗生素蛋白avidin溶液和30μL 2μM biotin-ssDNA溶液混合在40μL PBS緩沖液中，在30～37℃下反應20-30min。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟2)中所述加熱反應具體為：先在30～37℃下反應20min后，再85～95℃熱水浴20-30min。

5.根據權利要求1或4所述的制備方法，其特征在于：步驟2)具體為：將10U Exo I剪切酶加入步驟1)培養后的溶液中，在37℃下反應20min后，85℃熱水浴，熱水浴20min后拿出冷卻至室溫。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟3)具體為：將200μL AuNPs加入步驟2)得到的冷卻后的反應液中反應10min，最后加入120μL 0.2M的NaCl溶液，利用AuNPs在高鹽濃度下發生聚沉而使溶液顏色變化，制備得到化學生物傳感器。

7.基于高濃度鹽溶液下金納米的聚沉構建的化學生物傳感器，其特征在于，采用權利要求1-6任一項所述的方法制備得到。

8.權利要求1-6任一項所述方法制備的基于高濃度鹽溶液下金納米的聚沉構建的化學生物傳感器用于檢測抗生素蛋白avidin的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，具體檢測方法為：將biotin標記在DNA單鏈上并和avidin結合構建末端保護體系對DNA單鏈起保護作用，保護DNA不被Exo I剪切酶水解，由于單鏈DNA和AuNPs之間的相互作用，使得AuNPs在高鹽濃度下不發生聚沉，不同濃度的avidin溶液，體系顏色不同，吸光度不同，實現對不同濃度的avidin定量檢測。