[發明專利]一種能使稻屬植株快速脫病脫毒的扦插育苗方法

有效

• 申請號: 201710199447.X
• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN106962085B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 陳越;程在全;陳玲;王玲仙;殷富有;柯學;肖素勤;鐘巧芳;付堅;王波;張敦宇;余騰瓊;李定琴;蔣聰;曾民;楊雅云;黃興奇
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院生物技術與種質資源研究所
• 主分類號: A01G2/10
• 分類號: A01G2/10;A01G22/22;A01G31/00;A01G31/02
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

1.一種能使稻屬植株快速脫病脫毒的扦插育苗方法，其特征在于該方法的具體步驟如下：

a.野外取材：在晴天早晨露水未干時用剪刀剪取帶病或生長狀態瘦弱的稻屬植株上的帶節莖稈，取材后立即放入盛有清水的桶中，以避免莖稈失水；再按照不同株系用保鮮膜包裹莖稈，置于冰袋中保鮮帶回實驗室；

b.莖稈脫病脫毒滅菌處理：帶回實驗室的稻屬莖稈在流動的自來水下沖洗10分鐘，將表面的泥漿和污垢徹底沖洗干凈后，用體積百分比為75％的酒精棉球擦拭莖稈，并用剪刀將莖稈剪成5cm或7cm的段，莖稈生物學下方剪成斜口，生物學上段剪成平口，每段有1個結節；在無菌操作臺用鑷子剝離表面帶病或發霉葉鞘，保留無病葉鞘，用體積百分比為75％的酒精浸泡20秒，表面滅活后用無菌蒸餾水沖洗5次或6次；用體積百分比為6％的次氯酸鈉溶液表面滅活3分鐘，搖動滅菌瓶，最后用無菌蒸餾水清洗10次或12次；

c.莖稈扦插的預處理：在無菌操作臺中將用無菌蒸餾水配制好的質量體積比為3％的瓊脂糖倒入培養瓶中，瓊脂糖厚度3cm，待瓊脂糖凝固后，將滅菌處理好的莖稈段斜口端向下插入瓊脂糖中固定，根據莖稈段的長度在培養瓶中加入深度為3cm已滅菌的自來水，用封口膜封口后置于28℃，相對濕度60％的暗培養箱中培養；待莖稈處長出1cm或2cm新芽后在無菌操作臺中將培養瓶中的自來水倒掉，并用已滅菌的自來水清洗培養瓶中莖稈3次，清洗后在培養瓶中再加入深度為1cm的滅菌自來水，封口膜封口后放入28℃，光照強度1600Lux，光照時間為每天6:00-22:00時，空氣相對濕度60％的光照培養箱中培養2天；

d.莖稈的扦插：在無菌操作臺中用滅菌的鑷子取出已出芽的莖稈插入盛有土的組培瓶中，莖稈插入土的深度為莖節剛好被土覆蓋，加土的量占整個組培瓶的1/2，并在上面鋪一層厚度為5mm珍珠巖；莖稈扦插后在組培瓶中加入10mL已滅菌的自來水，用封口膜封口后放入28℃，空氣相對濕度60％，光照強度2000 Lux，光照時間為每天6:00-22:00時的培養箱中培養，適時噴水，保證土壤濕潤；上述所用自來水、組培瓶、土以及珍珠巖均經121℃，20分鐘滅菌；

e.莖稈的復壯培養：莖稈扦插培養4-6天，待新幼芽長至5cm時每周加入pH5.8的3-5mL1/4 N6液體培養基；待新苗長至10cm時開始煉苗，將封口的封口膜更換為保鮮膜，在組培瓶中加入滅菌自來水，加入自來水的量為超過土壤表面1cm，煉苗處理的第1天至第5天，每天用大頭針在封口的保鮮膜上刺出8-15個小孔，第6天將小苗移到溫室，揭開保鮮膜，按常規水肥管理進行培養。