[發(fā)明專利]一種組合蛋白制備抗人胱抑素C多克隆抗體的方法和應用

有效

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• 申請日: 2017-03-29
• 公開（公告）號: CN108659132B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發(fā)明（設計）人: 周珂
• 申請（專利權）人: 拜蓋特生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07K16/38
• 分類號: C07K16/38;C07K1/22;G01N33/68
• 代理公司: 安徽盟友知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙) 34213
• 代理人: 樊廣秋

本發(fā)明公開的是一種組合蛋白制備抗人胱抑素C多克隆抗體的方法和應用，主要解決了現(xiàn)有單一抗原制備的抗人胱抑素C多克隆抗體特異性差、有效濃度低，不能滿足診斷試劑制備要求的問題。本發(fā)明包括在動物免疫、抗血清效價檢測、多克隆抗體的抗原?抗體親和純化三個步驟中均采用了重組人胱抑素C蛋白；動物免疫中采用一種重組人胱抑素C蛋白用于動物免疫；抗血清效價檢測中采用一種重組人胱抑素C蛋白用于酶聯(lián)免疫檢測中酶標板的包被；多克隆抗體的抗原?抗體親和純化中采用一種重組人胱抑素C蛋白用于偶聯(lián)填料并純化抗體。本發(fā)明制備的抗人胱抑素C多克隆抗體可作為重要生物原料應用于胱抑素C檢測試劑的制備，其試劑性能滿足診斷要求。

技術領域

本發(fā)明屬于生物工程技術領域，具體涉及的是一種利用不同重組人胱抑素C蛋白的組合制備抗人胱抑素C多克隆抗體的方法及其應用。

背景技術

血清胱抑素C濃度的檢測在臨床上具有非常重要的診斷意義，目前國內(nèi)已逐步開展胱抑素C診斷試劑的自主研發(fā)，血清胱抑素C濃度對腎功能受損、腎小管功能失常、急性心肌梗塞等各種疾病的診斷及病情觀察具有重要的臨床意義。因此開發(fā)出一種制備特異性強、靈敏度高、可以滿足診斷試劑性能要求的抗胱抑素C多克隆抗體的方法是非常重要的。

現(xiàn)有胱抑素C抗體的制備主要有兩種方法，一種是單克隆抗體的制備，另一種是多克隆抗體的制備。單克隆抗體制備的開發(fā)時間較長，產(chǎn)量較低、成本高。多克隆抗體的制備方法相對簡單、產(chǎn)量高，但抗人胱抑素C多克隆抗體的活性與診斷試劑的性能息息相關，而現(xiàn)有胱抑素C多克隆抗體的制備方法往往采用單一抗原免疫后即用硫酸銨沉淀法或Protein A柱層析法進行抗體的純化，純化后的抗體中夾雜著很多非特異性抗體，抗人胱抑素C多克隆抗體的有效含量低，這往往是導致不能制備出滿足臨床診斷要求的胱抑素C測定試劑的主要原因。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有單一抗原制備的抗人胱抑素C多克隆抗體特異性差和靈敏度低，不能滿足診斷試劑制備要求的問題；提供解決上述問題的一種利用不同重組人胱抑素C蛋白的組合制備抗人胱抑素C多克隆抗體的方法及其應用。本發(fā)明的設計思路是采用不同重組胱抑素蛋白的組合，在多克隆抗體制備工藝過程中避免產(chǎn)生或純化到非特異性抗體，因此獲得的抗人胱抑素C多克隆抗體具有有效含量高、特異性強、靈敏度高的特點，可滿足診斷試劑的制備要求。

為解決上述缺點，本發(fā)明的技術方案如下：

不同的重組人胱抑素C蛋白，包括Cys C-His蛋白、Cys C-GST蛋白和Cys C-Trx蛋白中的任意一種。所述Cys C-His基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，Cys C-His蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；Cys C-GST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，Cys C-GST蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；Cys C-Trx基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，Cys C-Trx蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

上述三種的重組人胱抑素C蛋白均包含人胱抑素蛋白的序列，包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

本發(fā)明中優(yōu)選的人胱抑素C蛋白具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列。本領域技術人員應該知曉，在本發(fā)明中所述人胱抑素C蛋白不僅局限于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，在其他報道中公開的、與本發(fā)明中SEQ ID NO:2所示序列類似的人胱抑素C蛋白序列也同樣適用于本發(fā)明。同時，僅僅通過增加、刪除或改變本發(fā)明SEQ ID NO:2所示蛋白序列中的個別氨基酸序列，該蛋白在生物學功能和制備技術上無創(chuàng)造性和新穎性，此類重組蛋白也同樣適用于本發(fā)明。