[發明專利]核酸擴增反應方法、核酸擴增反應裝置以及核酸擴增反應用試劑在審

申請號：	201710191715.3	申請日：	2017-03-28
公開（公告）號：	CN107236789A	公開（公告）日：	2017-10-10
發明（設計）人：	上原雅行	申請（專利權）人：	精工愛普生株式會社
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68;C12M1/00
代理公司：	北京集佳知識產權代理有限公司11227	代理人：	李洋,青煒
地址：	日本***	國省代碼：	暫無信息
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摘要：
搜索關鍵詞：	核酸擴增反應方法裝置以及應用試劑
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及核酸擴增反應方法、核酸擴增反應裝置以及核酸擴增反應用試劑。

背景技術

近年來，隨著基因的利用技術的發展，基因診斷、基因治療等利用了基因的醫療備受注目，除此之外在農業、畜牧業領域中，在品種辨別、品種改良中使用了基因的方法也被較多地開發。作為用于利用基因的技術，PCR(Polymerase Chain Reaction：聚合酶鏈反應)法等技術廣泛普及。今天，PCR法在生物體物質的信息解析中成為必不可缺的技術。

PCR法是對包含成為擴增的對象的核酸(靶核酸)以及試劑的溶液(反應液)實施熱循環，從而使靶核酸擴增的方法。熱循環是使兩個階段以上的溫度周期性地施加于反應液的處理。在PCR法中，通常實施兩個階段或者三個階段的熱循環的方法。

例如，在專利文獻1中記載了一種核酸擴增反應裝置，其使填充有反應液(液滴)以及不與反應液混和且比重小于反應液的液體(油等)的反應容器繞旋轉軸旋轉，憑借比重差使反應液移動并進行熱循環。在專利文獻1中，為了檢測核酸擴增，而使用熒光標志探針。

專利文獻1：日本特開2012-115208號公報

然而，要求基于PCR的產物的生成時間的縮短化。然而，在專利文獻1所記載的技術中，若使PCR的反應時間(改性反應用的時間、退火反應/伸長反應用的時間)縮短(若使PCR高速化)，則例如存在核酸與熒光標志探針不充分地混合(Hybridization)，從而無法高靈敏度地檢測核酸的擴增的情況。

發明內容

本發明的幾個方式的目的之一在于提供一種即使使PCR高速化，也能夠高靈敏度地檢測核酸的擴增的核酸擴增反應方法。另外，本發明的幾個方式的目的之一在于提供一種即使使PCR高速化，也能夠高靈敏度地檢測核酸的擴增的核酸擴增反應裝置。另外，本發明的幾個方式的目的之一在于提供一種即使使PCR高速化，也能夠高靈敏度地檢測核酸的擴增的核酸擴增反應用試劑。

本發明的核酸擴增反應方法包含對包含核酸的擴增所使用的核酸擴增反應試劑的反應液施加用于使上述核酸擴增的熱循環的工序，

在上述熱循環中，退火反應以及伸長反應用的加熱時間為1秒以上10秒以下，

上述核酸擴增反應試劑包含正向引物、反向引物、聚合酶以及熒光標志探針，

包含于上述反應液的上述正向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于上述反應液的上述反向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于上述反應液的上述聚合酶的量為0.5U以上4U以下，

包含于上述反應液的上述熒光標志探針的濃度為0.15μM以上1.2μM以下。

在上述的核酸擴增反應方法中，即使使PCR高速化，也能夠高靈敏度地檢測核酸的擴增(詳細參照后述的“4.實驗例”)。

在本發明的核酸擴增反應方法中，

上述核酸擴增反應試劑也可以包含dNTP，

包含于上述反應液的上述dNTP的濃度為0.125mM以上1mM以下。

在上述的核酸擴增反應方法中，即使使PCR高速化，也能夠更加可靠且高靈敏度地檢測核酸的擴增。