[發(fā)明專利]核酸擴增反應方法、核酸擴增反應裝置以及核酸擴增反應用試劑

在審

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• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN107236789A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設計）人: 上原雅行
• 申請（專利權）人: 精工愛普生株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12M1/00
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權代理有限公司11227
• 代理人: 李洋,青煒

1.一種核酸擴增反應方法，其中，

包含向包含核酸的擴增所使用的核酸擴增反應試劑的反應液施加用于使所述核酸擴增的熱循環(huán)的工序，

在所述熱循環(huán)中，退火反應以及伸長反應用的加熱時間為1秒以上10秒以下，

所述核酸擴增反應試劑包含正向引物、反向引物、聚合酶以及熒光標志探針，

包含于所述反應液的所述正向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于所述反應液的所述反向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于所述反應液的所述聚合酶的量為0.5U以上4U以下，

包含于所述反應液的所述熒光標志探針的濃度為0.15μM以上1.2μM以下。

2.根據(jù)權利要求1所述的核酸擴增反應方法，其中，

所述核酸擴增反應試劑包含dNTP，

包含于所述反應液的所述dNTP的濃度為0.125mM以上1mM以下。

3.根據(jù)權利要求2所述的核酸擴增反應方法，其中，

所述正向引物的濃度為0.8μM以上3.2μM以下，

所述反向引物的濃度為0.8μM以上3.2μM以下，

所述聚合酶的量為1U以上4U以下，

所述熒光標志探針的濃度為0.3μM以上1.2μM以下，

所述dNTP的濃度為0.25mM以上1mM以下。

4.根據(jù)權利要求3所述的核酸擴增反應方法，其中，

所述正向引物的濃度為1.6μM以上3.2μM以下，

所述反向引物的濃度為1.6μM以上3.2μM以下，

所述聚合酶的量為2U以上4U以下，

所述熒光標志探針的濃度為0.6μM以上1.2μM以下，

所述dNTP的濃度為0.5mM以上1mM以下。

5.根據(jù)權利要求4所述的核酸擴增反應方法，其中，

所述正向引物的濃度為2.4μM以上3.2μM以下，

所述反向引物的濃度為2.4μM以上3.2μM以下，

所述聚合酶的量為3U以上4U以下，

所述熒光標志探針的濃度為0.9μM以上1.2μM以下，

所述dNTP的濃度為0.75mM以上1mM以下。

6.一種核酸擴增反應裝置，其中，包括：

安裝部，其能夠安裝核酸擴增反應用盒，所述核酸擴增反應用盒收容包含核酸的擴增所使用的核酸擴增反應試劑的反應液以及比重與所述反應液的比重不同且不與所述反應液混和的液體，并具有供所述反應液移動的流路；

溫度梯度形成部，其在所述流路形成溫度梯度；以及

移動機構，其以對所述反應液施加用于使所述核酸擴增的熱循環(huán)的方式使所述反應液移動，

所述移動機構在所述熱循環(huán)中，以退火反應以及伸長反應用的加熱時間成為1秒以上10秒以下的方式使所述反應液移動，

所述核酸擴增反應試劑包含正向引物、反向引物、聚合酶以及熒光標志探針，

包含于所述反應液的所述正向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于所述反應液的所述反向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于所述反應液的所述聚合酶的量為0.5U以上4U以下，

包含于所述反應液的所述熒光標志探針的濃度為0.15μM以上1.2μM以下。

7.一種核酸擴增反應用試劑，其是包含于施加用于使核酸擴增的熱循環(huán)的反應液的核酸擴增反應用試劑，其特征在于，

在所述熱循環(huán)中，退火反應以及伸長反應用的加熱時間為1秒以上10秒以下，

所述核酸擴增反應用試劑包含正向引物、反向引物、聚合酶以及熒光標志探針，

包含于所述反應液的所述正向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于所述反應液的所述反向引物的濃度為0.4μM以上3.2μM以下，

包含于所述反應液的所述聚合酶的量為0.5U以上4U以下，

包含于所述反應液的所述熒光標志探針的濃度為0.15μM以上1.2μM以下。