[發(fā)明專利]一種檢測玉米赤霉烯酮免疫親和凝膠檢測柱及其制備方法

在審

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• 申請日: 2017-03-28
• 公開（公告）號: CN108663515A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設計）人: 生威;王碩;張燕;吳賀森;李詩潔;劉越;劉冰
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙) 12219
• 代理人: 陳松

1.一種檢測玉米赤霉烯酮的免疫親和凝膠檢測柱，其特征在于：

凝膠檢測柱的原理是利用抗原抗體的特異性結合和辣根過氧化物酶的酶催反應，依據質控層和檢測層顏色變化，進而對待測物進行定性半定量分析。

2.根據權利要求1所述的玉米赤霉烯酮免疫親和凝膠檢測柱，其特征在于：

在一個標準的1mL固相萃取柱內設有兩層，上層為玉米赤霉烯酮抗體膠與封閉膠混合加入形成的檢測層，下層為HRP抗體膠與封閉膠混合加入形成的質控層，質控層和檢測層之間隔開一個3mm的空氣層。

3.權利要求2所述的玉米赤霉烯酮免疫親和凝膠檢測柱的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)封閉膠的制備，使用溴化氰活化瓊脂糖凝膠，之后加入HCl溶液，攪拌溶脹后轉移到具砂板層析柱中，用HCl溶液進行淋洗，再用偶聯(lián)緩沖液沖洗柱子，加入甘氨酸封閉液室溫反應2h，再用偶聯(lián)緩沖液和醋酸鈉緩沖液反復沖洗，待清洗液抽空，將制備好的封閉膠用PBS按體積比1:3懸起，放置于4℃保存待用；

(2)抗體膠的制備方法同封閉膠，差別僅在于封閉之前，在凝膠中加入的玉米赤霉烯酮特異性抗體或HRP特異性抗體，室溫偶聯(lián)2h。

(3)將聚乙烯墊片加入1mL的固相萃取柱中，然后加入200μL的HRP抗體膠與封閉膠比例為1:200的混合膠，加入第二層聚乙烯墊片，用注射器活塞將PBS壓出，在組裝好的質控層上方約3mm處加入第三層聚乙烯墊片，然后加入200μL的玉米赤霉烯酮抗體膠與封閉膠比例為1:10的混合膠，最后在頂部加入第四層墊片，用注射器活塞將PBS壓出。

4.根據權利要求1所述的組裝好的玉米赤霉烯酮免疫親和凝膠檢測柱，其特征在于：所述的玉米赤霉烯酮免疫親和凝膠檢測柱檢測玉米赤霉烯酮的檢測限為5μg/L。