[發明專利]一種檢測噻吩磺隆的Fe3O4@PEG@SiO2人工抗體的制備方法

有效

• 申請號: 201710185685.5
• 申請日: 2017-03-26
• 公開（公告）號: CN106970215B
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 漆天瑤;高大明;陳紅;汪叢;孫虹;張慧;朱德春;席小倩;周楊群;張凌云;劉安求;王曉晨
• 申請（專利權）人: 合肥學院
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N21/33;B01J20/26;B01J20/30;B01J20/28
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1.一種檢測噻吩磺隆的Fe₃O₄@PEG@SiO₂人工抗體的制備方法，包括在磁性納米粒子Fe₃O₄的表面修飾上聚乙二醇2000（Polyethylene glycol 2000，PEG 2000），表面包覆納米SiO₂殼層，形成芯-殼-殼結構，其特征在于：所述的人工抗體中洗脫位于SiO₂殼層中的印記分子，SiO₂殼層的內部形成具有與印記分子結構、大小和功能基互補的空穴結構，洗脫印記分子的人工抗體具有對目標分析物分子的特異性識別位點，實現對目標分析物分子選擇性識別和檢測，所述的人工抗體制備過程包括如下三個步驟：

1.1 第一步是表面修飾聚乙二醇2000的水溶性磁性Fe₃O₄納米粒子的制備：用精度為萬分之一的電子天平分別準確稱量2.6030 ~ 2.8030 g FeCl₃·6H₂O和1.8880 ~ 2.9880 gFeCl₂·4H₂O置于250 mL三口燒瓶中，在氮氣氣氛下，再將40 ~ 60 mL濃度為140~160 g·L^-1的聚乙二醇水2000溶液加入到上述燒瓶中，水浴加熱至45 ~ 55℃，在900 ~ 1100 rpm轉速下，加入氨水，將溶液pH值調節在10 ~ 12之間反應30 ~ 40min，用磁鐵將Fe₃O₄納米粒子與溶劑進行分離，用去離子水離心洗滌Fe₃O₄納米粒子、洗滌的Fe₃O₄納米粒子置于250 mL燒瓶中，再將40 ~ 60 mL濃度為90 ~ 100 g·L^-1的聚乙二醇2000水溶液加入到洗滌后的Fe₃O₄燒瓶中，再加入去離子水將混合溶液的pH值調節在8 ~ 9之間，最后，超聲分散10 ~ 20min，得到表面修飾聚乙二醇2000的Fe₃O₄納米粒子；

1.2 第二步是修飾聚乙二醇2000的Fe₃O₄納米粒子表面印記目標分子：取上述制得的6mL的表面修飾聚乙二醇2000的Fe₃O₄納米粒子溶液，置于100 mL磨口錐形瓶中，再加入20 ~30 mL去離子水稀釋，超聲分散5 ~ 10min后，將0.0210 ~ 0.0420 mg 噻吩磺隆目標分子置于上述溶液中，超聲分散5 ~ 10min后，靜置15 ~ 20 min使修飾聚乙二醇2000的Fe₃O₄納米粒子表面的羥基可進一步與噻吩磺隆目標分子相互作用，羥基上的氫原子與噻吩磺隆目標分子上帶有孤對電子的氮原子兩者之間形成氫鍵結合在磁性納米粒子周圍，將0.5 ~ 0.7mL 的交聯劑正硅酸四乙酯、適量的催化劑、0.0710 ~ 0.0920 mg 的十六烷基三甲基溴化銨加到上述混合溶液中去，超聲分散5 ~ 10min后，將錐形瓶置于搖床中以轉速280 ~ 320rpm、分階段升溫反應，印記交聯聚合，首先，在室溫下水解聚合反應1.5 ~ 2.5h，然后，30~40 ℃下水解聚合反應1.5 ~ 2.5h，再次，在40 ~ 50 ℃下水解聚合反應1.5 ~ 2.5h，最后，在50 ~ 70 ℃下水解聚合反應2 ~ 3 h，離心洗滌分離后得到表面印記目標分子Fe₃O₄@PEG@SiO₂納米粒子；

1.3 第三步是檢測噻吩磺隆的Fe₃O₄@PEG@SiO₂人工抗體的制備：將所得到印記噻吩磺隆的Fe₃O₄@PEG@SiO₂粒子分別均分至三支50 mL離心管中，再用工業乙醇超聲分散，如此反復3次，最后分別在上述離心洗滌后的Fe₃O₄@PEG@SiO₂粒子中加入5 ~ 15 mL去離子水，超聲分散，分別再加入10 ~ 30mL體積比為1：4的乙酸和丙酮混合液，放置搖床中在室溫下以200~ 300 rpm震蕩1h ~ 3h，將印記分子從印記位點中洗脫至溶液中，再將洗脫后的溶液以8000 rpm ~ 10000 rpm轉速離心5min ~ 10min，離心后的溶液倒去上清液，然后用無水乙醇超聲、離心、洗滌3次，最后再用去離子水超聲、離心、洗滌3次，得到具有選擇性識別印記分子的芯-殼-殼型Fe₃O₄@PEG@SiO₂人工抗體。