[發(fā)明專利]用于檢測(cè)新霉素的新霉素分子印跡?量子點(diǎn)聚合物及制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710183752.X
• 申請(qǐng)日: 2017-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN107024459A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂斌;劉燕婕;萬(wàn)迎春;鐘劍;葉磊;吳中喬;鄧耘;項(xiàng)陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢漢瑞隆德檢測(cè)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司42104
• 代理人: 馬輝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子印跡制備領(lǐng)域，尤其涉及一種用于檢測(cè)新霉素的新霉素分子印跡-量子點(diǎn)聚合物及制備方法。

背景技術(shù)

氨基糖苷類抗生素便宜、廣譜抗菌，可預(yù)防動(dòng)物發(fā)病，并具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用，在我國(guó)廣泛用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，最常使用的氨基糖苷類獸藥包括新霉素、慶大霉素、鏈霉素、二氫鏈霉素等。其中新霉素具有耳毒性、腎毒性、神經(jīng)肌肉阻斷等毒性，大量使用新霉素還容易產(chǎn)生耐藥性。歐盟明確規(guī)定禁止使用新霉素作為家畜的生長(zhǎng)促進(jìn)劑。為保障人群健康，我國(guó)、美國(guó)、歐盟均確定了對(duì)動(dòng)物源性食品中新霉素獸藥最大允許殘留限量。因此，如何快速準(zhǔn)確地測(cè)定食品中新霉素獸藥的殘留，對(duì)保證食品安全、保障人群健康具有重要意義。

目前用于食品中新霉素獸藥殘留的方法有微生物法、酶聯(lián)免疫(ELISA)法、色譜法、質(zhì)譜法等。微生物法利用抗生素可以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的特點(diǎn)，根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)狀況判斷樣品中是否存在抗生素，簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜的設(shè)備，但是不能區(qū)分具體的抗生素種類。ELISA法屬于免疫分析方法，利用特定的抗體測(cè)定某種抗生素，操作簡(jiǎn)單，快速，特異性強(qiáng)，但新霉素為小分子化合物，其抗體制備困難，且抗體穩(wěn)定性差，對(duì)熱、pH、鹽濃度等有嚴(yán)格要求，食品樣品需要經(jīng)過(guò)預(yù)處理，去除干擾物后，才能保證ELISA檢測(cè)的靈敏度和特異性，不宜用于現(xiàn)場(chǎng)直接快速檢測(cè)。色譜法及質(zhì)譜法均可測(cè)定具體新霉素的種類和含量，但需要復(fù)雜的樣品前處理過(guò)程和昂貴的儀器設(shè)備，無(wú)法用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。特別是新霉素的結(jié)構(gòu)缺少生色基團(tuán)，在色譜檢測(cè)中需要采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，或進(jìn)行衍生后利用熒光進(jìn)行測(cè)定。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器復(fù)雜昂貴，一般實(shí)驗(yàn)室不配備，且檢測(cè)靈敏度低。衍生法靈敏度高，但影響因素眾多，準(zhǔn)確性較低?？梢?jiàn)，目前迫切需要可快速準(zhǔn)確地測(cè)定新霉素的新方法，以有效監(jiān)測(cè)新霉素殘留，保障人群健康。

熒光檢測(cè)是常用的快速檢測(cè)方法，靈敏度高，設(shè)備簡(jiǎn)單，但是新霉素屬于無(wú)熒光基團(tuán)的化合物，無(wú)法使用熒光直接檢測(cè)。此外，熒光測(cè)定特異性較低，食品中的很多成分會(huì)干擾熒光檢測(cè)的準(zhǔn)確性。因此，需要一種可特異性結(jié)合靶抗生素，同時(shí)有效減少背景熒光干擾，且可以使用熒光測(cè)定不含熒光的新霉素的新方法。

人工抗體(又稱分子印跡聚合物，MIP)是化學(xué)合成的高分子聚合物，通過(guò)特定的空間結(jié)構(gòu)和化學(xué)鍵(包括共價(jià)鍵、離子鍵、氫鍵等)特異性識(shí)別和結(jié)合靶分子，其吸附特異性與天然抗體類似，但耐受有機(jī)溶劑、離子、酸堿、高溫和高壓。其中含熒光的MIP即熒光MIP，不僅可以特異性結(jié)合模板分子，同時(shí)模板分子的結(jié)合還可以導(dǎo)致熒光MIP發(fā)生熒光信號(hào)的改變(如熒光波長(zhǎng)改變，或者熒光強(qiáng)度改變)，根據(jù)熒光信號(hào)的改變，即可測(cè)定與熒光MIP特異性結(jié)合的模板分子的含量?？梢?jiàn)，熒光MIP可以利用熒光信號(hào)測(cè)定無(wú)熒光的化合物，且MIP與模板分子的特異性結(jié)合保證了熒光MIP檢測(cè)的特異性，十分適合用于快速測(cè)定非熒光化合物，如參考文獻(xiàn)“Y.Wu,et al.Monitoring bisphenol A and its biodegradation in water using a fluorescent molecularly imprinted chemosensor.Chemosphere,2015,119:515-523”。

新霉素結(jié)構(gòu)上一般含兩個(gè)或兩個(gè)以上的氨基，并通過(guò)糖苷鍵進(jìn)行連接。苯硼酸及其衍生物能與糖類化合物(包括氨基糖苷類抗生素)的1,2-或1,3-二醇基團(tuán)以及多醇羥基相互共價(jià)鍵，這一反應(yīng)具有較高的特異性。量子點(diǎn)是半導(dǎo)體熒光納米材料，其熒光波譜有激發(fā)光譜寬，發(fā)射光譜窄，熒光強(qiáng)度高，不易發(fā)生熒光漂白等優(yōu)點(diǎn)。已有研究發(fā)現(xiàn)，在量子點(diǎn)表面利用苯硼酸衍生物作為功能單體，合成糖蛋白MIP凝膠，可同時(shí)利用MIP的空間識(shí)別力和苯硼酸-糖基親和結(jié)合力，提高M(jìn)IP對(duì)靶分子的結(jié)合特異性如文獻(xiàn)“W Zhang,et al.A Fluorescence Nanosensor for Glycoproteins with Activity Based on the Molecularly Imprinted Spatial Structure of the Target and Boronate Affinity.Angew.Chem.Int.Ed.2014,53,12489–12493”。但是該方法制備的MIP只能測(cè)定稀釋了100倍的尿液中的靶蛋白質(zhì)，顯示該方法在存在高濃度干擾物的情況下檢測(cè)效果不佳，不適合用于復(fù)雜樣品的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容