[發明專利]高穿透性腫瘤靶向脂質插件的構建及其促進細胞及細胞膜制劑向腫瘤聚集的作用

在審

• 申請號: 201710179854.4
• 申請日: 2017-03-23
• 公開（公告）號: CN106924748A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 劉寶瑞;沙慧子;丁乃清
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司32252
• 代理人: 戴朝榮

技術領域

本發明屬于生物與新醫藥技術領域，特別涉及高穿透性腫瘤靶向生物膜載藥體系、主動靶向性高穿透性細胞的制備及其在抗腫瘤中的應用。

背景技術

本發明之前，包括傳統化療藥物、抗腫瘤藥物納米制劑在內的多種抗腫瘤藥物多缺乏主動的腫瘤靶向性，治療效果差強人意。這些藥物進入人體后的分布多無組織特異性，且由于復雜的腫瘤微環境，藥物無法滲透至腫瘤病灶深部，影響其抗腫瘤效果。至目前，經過研究者們的不斷努力，也有不同類型的主動腫瘤靶向納米載體被研發出來，但這些技術大多限于實驗研究。近十年來，腫瘤納米靶向藥物載體領域發展迅速，制備載體的材料經歷了一個由天然高分子材料到人工合成智能化材料再到天然材料的轉變過程。然而這些FDA批準的材料仍然是異體物質，我們迫切地想尋找到一種以人體自身物質為材料構建的納米藥物載體。

在越來越引起人們重視的免疫細胞治療領域，盡管存在類似于嵌合抗原受體T細胞療法等可以實現腫瘤的靶向性，但卻在實體瘤的治療中進展緩慢。免疫細胞難以有效進入腫瘤組織是其中一個重要的原因。因此，改善免疫細胞的主動靶向性與穿透性是進一步提高抗腫瘤治療效果的關鍵。

發明內容

本發明是在考慮到目前研究進展、臨床迫切需求等信息后設計、實施的，其優勢恰巧在于可以一定程度上克服上述局限。

本發明利用含有穿透肽iRGD成分的物質作為實現腫瘤主動靶向性、高穿透性的分子，將其修飾一段脂質分子，形成一個能夠明確增強腫瘤靶向性的多用腫瘤靶向插件。成功構建后經反復實驗驗證，本發明具有明確腫瘤靶向性，能夠切實地增強免疫細胞、細胞膜制劑的腫瘤局部聚集，提高抗腫瘤治療效果。

本發明提供的技術方案是：

實現主動腫瘤靶向、高穿透的含有穿透肽iRGD成分的脂質插件，該插件由含有高穿透肽iRGD的成分以及DSPE-PEG-MAL構成，可嵌插在多種載藥體系、免疫細胞上，實現其主動腫瘤靶向性。

所述含有高穿透肽iRGD的成分為iRGD、含有iRGD成分的多肽或融合蛋白如anti-EGFR-iRGD等以及含有iRGD成分的其他物質。

所述的主動腫瘤靶向、高穿透的含有穿透肽iRGD成分的脂質插件的制備方法為：通過加成方法(如邁克爾加成法)將含有穿透肽iRGD的成分進行DSPE-PEG-MAL修飾，再進行細胞或者細胞膜插入，具體包括以下步驟：

(1)含有穿透肽iRGD成分的脂質插件的制備方法：

將含有穿透肽iRGD成分的多肽或蛋白與DSPE-PEG-MAL以一定比例在緩沖液(如HEPES緩沖液)中進行加成反應(如邁克爾加成反應)，在一定溫度下置于搖床上孵育一段時間，反應后溶液進行多次透析，透析后液體制備成凍干粉備用，得到含有iRGD成分的多肽/蛋白-PEG-DSPE；

(2)插件修飾：

插件修飾細胞：將含有iRGD成分的多肽/蛋白-PEG-DSPE與細胞37℃孵育一定時間(如30分鐘)，離心棄上清，用培養基重懸備用；

或者插件修飾生物膜類制劑：將含有iRGD成分的多肽/蛋白-PEG-DSPE與生物膜類制劑37℃孵育一定時間(如30分鐘)，孵育后離心(參數舉例：14000rpm，15分鐘)，棄上清，沉淀加入適量生理鹽水重懸，探頭超聲一定時間(參數舉例：30s)進行重懸。

本發明還提供上述的主動腫瘤靶向、高穿透的含有穿透肽iRGD成分的脂質插件用于免疫治療及其他抗腫瘤治療，含有穿透肽iRGD成分的脂質插件作為腫瘤靶向分子在免疫治療和生物膜載體中用于腫瘤的治療。

含有穿透肽iRGD成分的脂質插件嵌插至各種細胞(如免疫細胞)，作為提高細胞靶向性應用。細胞不受限于細胞類型及分子表型。

所述腫瘤不限于腫瘤類型。

含有穿透肽iRGD成分的脂質插件的液體制劑、粉劑，適于經直腸、鼻內、肺部、陰道內、外部、口服或腸胃外，包括皮下、植入、靜脈內、腹腔和肌內給藥。

有益效果：

1、本發明所制備的含有iRGD成分的多肽/蛋白-PEG-DSPE制備過程簡單、不涉及有毒有機溶劑、可重復性好。

2、高穿透性iRGD成分使修飾的細胞積聚于腫瘤局部，同時使細胞在腫瘤局部獲得良好的穿透性，使其更多地進入腫瘤組織而發揮作用。

3、高穿透性iRGD成分使修飾的細胞膜制劑積聚于腫瘤局部，并在腫瘤局部獲得良好的穿透性，使其更多地進入腫瘤組織而發揮抗腫瘤作用。