[發明專利]一種亞硝化細菌的PCR鑒定方法在審
| 申請號： | 201710177397.5 | 申請日： | 2017-03-22 |
| 公開（公告）號： | CN106755555A | 公開（公告）日： | 2017-05-31 |
| 發明（設計）人： | 車樹剛;馬韻升;劉圣鵬;馬娜娜;張心青;冉新新;郭南南;李琦;任曉燕;張蕭蕭 | 申請（專利權）人： | 黃河三角洲京博化工研究院有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 濟南舜源專利事務所有限公司37205 | 代理人： | 趙斌,苗峻 |
| 地址： | 256500 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 硝化細菌 pcr 鑒定 方法 | ||
1.一種亞硝化細菌的PCR鑒定方法，其特征在于：PCR擴增反應條件具體如下：
2.根據權利要求1所述的亞硝化細菌的PCR鑒定方法，其特征在于：具體步驟如下：
⑴引物的設計與合成：以亞硝化細菌的專屬特征性基因氨單加氧酶基因為模板，根據引物設計原則，利用primer 5.0軟件設計并合成一對特異性引物，引物具體序列如下：
上游引物(F)：5'-GGGGTTTCTACTCCTGGT-3'，其核苷酸序列如Seq ID No:1所示；
下游引物(R)：5'-CCCCTCGGGAAAGCCTTCTTC-3'，其核苷酸序列如Seq ID No:2示；
⑵菌種基因組DNA的提取：采用天根細菌基因組DNA提取試劑盒提取待測菌種的基因組DNA；
⑶PCR擴增體系：分別以步驟(1)中合成的特異引物為PCR擴增引物，以步驟(2)中提取的基因組DNA為PCR擴增模板，進行PCR擴增，25ul PCR擴增體系如下：
⑷PCR擴增反應條件：PCR擴增體系準備好后，以引物的退火溫度為53℃設定PCR擴增的反應條件，具體反應條件如下：
⑸瓊脂糖水平電泳：觀察是否含有大小為526bp目標條帶，其核苷酸序列如Seq ID No:3所示；若有則判定為試樣中含有亞硝化細菌。
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