[發明專利]一種基于熔解曲線法單管同時檢測副流感病毒和冠狀病毒的引物及其應用

在審

• 申請號: 201710169042.1
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN106868213A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 任緒義;虞閏六;羅英;金亞南
• 申請（專利權）人: 重慶迪安醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 丁靜靜,肖明芳

1.一種基于熔解曲線法單管同時檢測副流感病毒和冠狀病毒的引物，其特征在于，包括如下引物：SEQ ID NO.：1～7所示的反轉錄引物、SEQ ID NO.：8～21如擴增引物、SEQ ID NO.：22～23啟動擴增的通用引物、SEQ ID NO.：24～30分子信標探，所述分子信標探針的兩端分別帶有熒光基團和猝滅基團。

2.根據權利要求1所述的基于熔解曲線法單管同時檢測副流感病毒和冠狀病毒的引物，其特征在于，所述的副流感病毒包括副流感病毒I型、副流感病毒II型、副流感病毒III；所述的冠狀病毒包括：冠狀病毒229E、冠狀病毒OC43、冠狀病毒NL63、冠狀病毒HKU1。

3.根據權利要求1所述的基于熔解曲線法單管同時檢測副流感病毒和冠狀病毒的引物，其特征在于，所述熒光基團包括FAM、HEX、Cy5，所述淬滅基團為DABCYL。

4.權利要求1～3任一所述基于熔解曲線法單管同時檢測副流感病毒和冠狀病毒的引物在檢測副流感病毒和冠狀病毒中的應用。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，檢測時所述所述通用引物在擴增體系中的終濃度為0.1uM；所述擴增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物濃度為0.02uM，所述下游引物濃度為0.2uM；分子信標探針濃度為0.2uM。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述檢測是基于Tem-PCR的熔解曲線分析，具體程序如下：

熱啟動：95℃ 15min；

富集階段：94℃ 30s，52℃ 1min，72℃ 1min 15循環；

加尾擴增：94℃15s，70℃ 1.5min(6cycles)；

PCR擴增：94℃ 15s，52℃ 15s，72℃15s 55循環；

延伸階段：72℃ 3min；

熔解分析：95℃ 1min，37℃ 5min，80℃—30℃ 0.1℃/s。