[發明專利]一種固定化的熒光標記細胞色素c、其制備方法及用途在審
| 申請號： | 201710166931.2 | 申請日： | 2017-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN106950209A | 公開（公告）日： | 2017-07-14 |
| 發明（設計）人： | 唐乾;曹洪玉;王立皓;鄭學仿 | 申請（專利權）人： | 大連大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 大連智高專利事務所(特殊普通合伙)21235 | 代理人： | 胡景波 |
| 地址： | 116622 遼寧省*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 固定 熒光 標記 細胞 色素 制備 方法 用途 | ||
1.一種熒光標記細胞色素c的固定化方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)從微生物中提取純化細胞色素c；
(2)將細胞色素c與熒光素反應制備熒光標記的細胞色素c，除去游離熒光素；
(3)用異丙醇鋁制備鋁膠母液；
(4)將步驟(2)和(3)的產物混勻，涂布固相載體；
其中，所述細胞色素c來自光合細菌。
2.根據權利要求1所述熒光標記細胞色素c的固定化方法，其特征在于，所述細胞色素c包含的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根據權利要求2所述的固定化方法，其特征在于，步驟(1)具體為：將菌體凍融后，超聲破碎，上清液過離子交換色譜，洗脫液再過分子篩層析，獲得電泳純的細菌源細胞色素c。
4.根據權利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步驟(2)具體為：將1mg細胞色素c溶解于NaHCO3溶液中，加入5μl 20mM的熒光素琥珀酰亞胺酯，混勻，4℃反應2h，0.01M的pH7.4磷酸鹽緩沖液透析，除去未結合的游離熒光素二乙酸酯。
5.根據權利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步驟(3)具體為：取2g異丙醇鋁，加入44ml沸水中，80℃攪拌45min，加入1.2mL 1M的HCl，煮沸1h，冷卻至4℃。
6.根據權利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步驟(4)具體為：取等量的步驟(2)和(3)的產物混勻，4℃反應1h，均勻涂覆于固相載體表面。
7.根據權利要求1-6任一所述固定化方法制備的固定化熒光標記細胞色素c。
8.權利要求7所述固定化的熒光標記細胞色素c在制備檢測生物樣品中NO的檢測試劑中的用途。
9.權利要求7所述固定化的熒光標記細胞色素c在制備檢測生物樣品中NO的檢測裝置中的用途。
10.如權利要求9所述的用途，其中所述的裝置為細胞色素c珠、細胞色素c片、細胞色素c容器或細胞色素c傳感器。
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