[發(fā)明專利]產(chǎn)生產(chǎn)量大大提高的PHB缺陷型鞘氨糖的鞘氨醇單胞菌菌株

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710161948.9
• 申請日: 2010-07-30
• 公開（公告）號: CN106929458A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 南茜·E·哈丁;Y·N·帕特爾;托德·塔拉舍克
• 申請（專利權(quán)）人: CP凱爾科美國公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/26;C12R1/01
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11262
• 代理人: 王瑋瑋,鄭霞

1.鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)的突變菌株，所述突變菌株包含：至少一種基本上或完全清除聚羥基丁酯(PHB)的產(chǎn)生的遺傳修飾；至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾，其中所述導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾包括提高參與鞘氨糖合成的至少一種基因的表達(dá)的遺傳修飾，其中所述參與鞘氨糖合成的至少一種基因選自由菌株ATCC PTA-10102所含質(zhì)粒以及菌株ATCC PTA-10103所含質(zhì)粒中所含的基因組成的組；借此，所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株相對于含有所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾并缺少所述至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾的同類系菌株，產(chǎn)生增加的大致上無PHB的鞘氨糖產(chǎn)生，其中所述鞘氨糖是定優(yōu)膠，并且其中所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株能夠以至少約0.15g/L/小時(shí)的速率產(chǎn)生定優(yōu)膠或產(chǎn)生至少約12g/L的定優(yōu)膠產(chǎn)量。

2.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中所述至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾選自由以下組成的組：(i)參與鞘氨糖合成的至少一種基因與異位啟動子的可操作連接；(ii)參與鞘氨糖合成的至少一種基因的每細(xì)菌染色體的拷貝數(shù)增加；和(iii)其任意組合，其中所述參與鞘氨糖合成的至少一種基因中的每一種為細(xì)菌染色體或染色體外元件所包含。

3.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾是使選自由phaA基因、phaB基因和phaC基因或其組合組成的組的基因組成性或條件性失活或缺失的突變。

4.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾是使phaC基因失活的插入或缺失。

5.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株能夠以至少約0.2g/L/小時(shí)的速率產(chǎn)生定優(yōu)膠或產(chǎn)生至少約15g/L的定優(yōu)膠產(chǎn)量。

6.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株將定優(yōu)膠的產(chǎn)生速率或產(chǎn)量相對于含有所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾并缺少所述至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾的同類系菌株，提高至少約50％。

7.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中產(chǎn)自所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株的定優(yōu)膠是澄清的以在15％HCl溶解性和殘留測試中產(chǎn)生少于0.5％的殘留或當(dāng)使用氣相色譜測量時(shí)產(chǎn)生少于0.1wt％的PHB。

8.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中產(chǎn)自所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株的定優(yōu)膠是澄清的，并且其中所述澄清的定優(yōu)膠再水合為1升的在海水中的0.04％定優(yōu)膠能夠在大約20psi的流動壓力下，在少于5分鐘內(nèi)通過聚碳酸酯膜過濾器；其中所述聚碳酸酯膜過濾器直徑大約47mm并具有大約3微米的孔徑大小。

9.如權(quán)利要求1所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中產(chǎn)自所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株的定優(yōu)膠大致上無PHB，并且其中所述定優(yōu)膠是澄清的以展現(xiàn)至少約40標(biāo)度盤讀數(shù)的海水3rpm粘度、至少約37,000cp的海水0.3rpm粘度或至少約3,500cp的在聚乙二醇分散劑存在下的低剪切速率粘度。

10.鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，所述突變菌株包含：至少一種基本上或完全清除聚羥基丁酯(PHB)的產(chǎn)生的遺傳修飾；至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾，其中所述導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾包括提高參與鞘氨糖合成的至少一種基因的表達(dá)的遺傳修飾，其中所述參與鞘氨糖合成的至少一種基因選自由菌株ATCC PTA-10102所含質(zhì)粒中的插入物以及菌株ATCC PTA-10103所含質(zhì)粒中的插入物中所含的基因組成的組；借此，所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株相對于含有所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾并缺少所述至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾的同類系菌株，產(chǎn)生增加至少50％的定優(yōu)膠產(chǎn)生。

11.如權(quán)利要求10所述的鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，其中所述參與鞘氨糖合成的至少一種基因選自由質(zhì)粒pS8中的插入物(SEQ ID NO:1)和質(zhì)粒pX6中的插入物(SEQ ID NO:54)所含基因組成的組。

12.鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株，所述突變菌株包含：至少一種基本上或完全清除聚羥基丁酯(PHB)的產(chǎn)生的遺傳修飾；至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾，其中所述導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾包括提高參與鞘氨糖合成的至少一種基因的表達(dá)的遺傳修飾，借此，所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株相對于含有所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾并缺少所述至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾的同類系菌株，產(chǎn)生增加的大致上無PHB的鞘氨糖產(chǎn)生，其中所述參與鞘氨糖合成的至少一種基因選自由質(zhì)粒pS8中的插入物(SEQ ID NO:1)和質(zhì)粒pX6中的插入物(SEQ ID NO:54)所含基因組成的組；其中所述鞘氨糖是定優(yōu)膠，并且所述鞘氨醇單胞菌屬的突變菌株將定優(yōu)膠的產(chǎn)生速率或產(chǎn)量相對于含有所述至少一種基本上或完全清除PHB的產(chǎn)生的遺傳修飾并缺少所述至少一種導(dǎo)致增加的鞘氨糖產(chǎn)生的遺傳修飾的同類系菌株，提高至少約50％。