[發(fā)明專利]一種高危人乳頭瘤病毒分型檢測(cè)方法與試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710160534.4
• 申請(qǐng)日: 2017-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN107043828A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭圣明;吳大治;夏懿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海星耀醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高危人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)方法與試劑盒，其特征在于，采用人乳頭瘤病毒通用引物SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8以及SEQ ID No.9，和人乳頭瘤病毒16、18、31、52、59型特異性TaqMan探針SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17、SEQ ID No.18和SEQ ID No.19，以及在上述TaqMan探針互補(bǔ)序列基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)且與探針序列不完全配對(duì)的PCO探針SEQ ID No.20、SEQ ID No.21和SEQ ID No.22，要求TaqMan探針和PCO探針標(biāo)記相同熒光發(fā)光基團(tuán)、TaqMan探針3’端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)、PCO探針3’端進(jìn)行封閉標(biāo)記，通過熒光PCR擴(kuò)增技術(shù)結(jié)合單波長(zhǎng)熔解曲線分析技術(shù)在單管反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)人乳頭瘤病毒16、18、31、52、59型核酸分型檢測(cè)。

2.如權(quán)利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，所用人乳頭瘤病毒16、18、31、52、59型檢測(cè)靶序列為SEQ ID No.10、SEQ ID No.11、SEQ ID No.12、SEQ ID No.13、SEQ ID No.14，設(shè)計(jì)的通用引物SEQ ID No.1～SEQ ID No.9能擴(kuò)增SEQ ID No. 10～SEQ ID No. 14靶序列連續(xù)130～180個(gè)核苷酸，根據(jù)序列優(yōu)化設(shè)計(jì)后的引物能擴(kuò)增其連續(xù)90-98個(gè)核苷酸。

3.如權(quán)利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，分別基于SEQ ID No.10～SEQIDNo.14靶序列設(shè)計(jì)的型特異性TaqMan探針SEQ ID No.15～SEQ ID No.19，長(zhǎng)度為24～35個(gè)核苷酸， 5’端均標(biāo)記相同的熒光發(fā)光基團(tuán)、3’端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)。

4.如權(quán)利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，根據(jù)SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17、SEQ ID No.18和SEQ ID No.19探針的互補(bǔ)序列，設(shè)計(jì)3～6個(gè)堿基的錯(cuò)配或者不互補(bǔ)，優(yōu)化設(shè)計(jì)出PCO探針SEQ ID No.20、SEQ ID No.21和SEQ ID No.22，3’端標(biāo)記PHO或BHQ。

5.如權(quán)利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，試劑盒所用的人乳頭瘤病毒分型通用引物序列可以為和SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8以及SEQ ID No.9同源性大于85％以上的序列，TaqMan熒光探針可以為SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17、SEQ ID No.18和SEQ ID No.19同源性大于85％以上序列，探針5’端標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)，3’端標(biāo)記BHQ2淬滅基團(tuán)。

6.如權(quán)利要求1所述的方法與試劑盒，其特征在于，引入了一個(gè)內(nèi)參照系統(tǒng)用于避免檢測(cè)結(jié)果假陰性，內(nèi)參照系統(tǒng)包括內(nèi)參引物SEQ ID No.23和SEQ ID No.24、內(nèi)參探針SEQ ID No.25，其中探針SEQ ID No.25 5’端標(biāo)記CY5熒光基團(tuán)、3’端標(biāo)記BHQ2淬滅基團(tuán)，內(nèi)參探針也可以是和SEQ ID No.25序列同源性大于85％以上的序列。

7.如權(quán)利要求1所述方法與試劑盒，其特征在于，試劑盒包括PCR緩沖液、引物探針、DNA聚合酶、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照以及臨界陽性對(duì)照。