[發明專利]快速區別一年生黑麥草和多年生黑麥草種子的鑒定方法

在審

• 申請號: 201710155035.6
• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN106770148A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 余玲;王彥榮;王玉青;劉志鵬;胡小文;曾彥軍
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司62102
• 代理人: 張真

技術領域

本發明涉及一種快速區別一年生黑麥草和多年生黑麥草種子的鑒定方法。具體涉及一年生黑麥草和多年生黑麥草種子萌發后幼根在紫外線照射下不同的熒光反應及其檢測方法。

背景技術

一年生黑麥草(Lolium multiflorum)和多年生黑麥草(L.perenne)生長速度快，產草量高，是青飼、調制干草、放牧或混播的優質禾本科牧草，亦是用于城市綠化的重要草坪草，因而在我國有著廣泛的種植范圍和種植面積。然而這兩種黑麥草種子在外觀形態上非常相似(圖1)，給種子的純度鑒定帶來很大困擾，是黑麥草類種子質量檢驗中的一大難題。生產中一旦混雜，將對其種植和利用產生不可挽回的損失。因而，快速、準確區分一年生黑麥草和多年生黑麥草種子，對于提高我國黑麥草類種子的利用具有十分重要的意義。

前人對一年生黑麥草和多年生黑麥草種子的鑒定技術研究可歸納為四類：

一是形態鑒定。即根據種子的大小、顏色、形狀、芒以及內外稃的脈紋、質地、長度等形態學特征進行區分。但是由于兩種黑麥草種子的形狀、大小和顏色十分相似，特別是在成熟度不一致以及環境、氣候等因素的影響下，形態特征基本無規律可循，加之清選、去芒等現代加工技術的應用，更是削弱了它們固有的特征，致使鑒定工作難度極大，鑒定結果存在一定的主觀性。

二是申請號為201410023022X，名稱為“鑒定多年生黑麥草種子真偽的特異分子標記試劑盒及其方法”的中國專利。公開了一種鑒定多年生黑麥草種子真偽的特異分子標記試劑盒的方法，該方法提供了兩種黑麥草種子的特異分子標記引物、試劑盒以及標記方法。但是在鑒定中需要分子專業技術人員，以及PCR儀、電泳儀和化學發光凝膠成像系統等大型昂貴的儀器設備，因而限制了其推廣應用。

三是田間鑒定。即將種子播種于試驗田，待出苗后開始觀察、鑒定，試驗持續整個生育期。該方法成本高、周期長、效率低，無法滿足生產和市場需要。

四是熒光反應鑒別試驗(閻旭東，1999)。將25粒種子在20cm x30cm的濾紙上擺放成一行卷成筒狀，置于20℃-30℃變溫培養箱中，黑暗條件下持續培養18d，發芽后的種子置于波長3600-3700埃的紫外線檢測器下用紫外光線照射，根據胚根的熒光強度進行評定。該試驗每個黑麥草種參試種質僅為2個，缺乏代表性；發芽率偏低，影響鑒別結果的準確性；發芽持續18d，未達到快速鑒定的目的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速區別一年生黑麥草和多年生黑麥草種子的鑒定方法，以解決現有特異分子標記技術需要專業技術人員和大型儀器設備，以及熒光反應鑒別試驗未達到快速鑒定的不足。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種快速區別一年生黑麥草和多年生黑麥草種子的鑒定方法，其主要特點包括如下步驟：

(1)發芽床：在培養皿中鋪設雙層濾紙作為發芽床；

(2)破除休眠種子預處理：用0.15-0.25％KNO₃溶液代替水潤濕發芽床以破除休眠種子；

(3)置床：將凈種子擺放在用0.15-0.25％KNO₃溶液潤濕的發芽床上；

(4)培養：將培養皿置于培養箱內，在不超過250lux的弱光條件下保持29℃～31℃恒溫持續培養7d～8d，即幼根發育至根跡產生的熒光明顯能被檢出時，將培養皿移至暗室；

(5)鑒定：在300nm～400nm輻射波長的紫外光下觀察培養皿內種子幼根對紫外線照射產生的不同反應；一年生黑麥草種子的幼根在紫外線照射下顯現熒光，多年生黑麥草種子的幼根在紫外線照射下不顯現熒光。

本發明的有益效果，可快速有效的鑒定出一年生黑麥草和多年生黑麥草種子。此方法具有準確性高、穩定性強、簡單快捷、易于推廣等特點，能夠對黑麥草類種子進行批量檢測，為準確區分黑麥草類種子提供可靠的技術支持。本發明處理方法簡單、快捷、成本低、易操作、準確度高，穩定性好，在實驗室條件下短時間內即可完成，易于推廣應用。本研究采用的40份黑麥草類種質(表1和表3)分別來自北京、四川、云南、甘肅、寧夏等5個省區的14個公司，以及國家草種質資源庫，基本覆蓋了目前我國市場上流通的黑麥草類草種，因而具有很強的代表性和推廣價值。本發明有助于種子檢測中心(站)，種子生產、經營企業實驗室，以及基層種子管理站、草原站、農技站工作人員對兩種黑麥草種子的區分，在黑麥草產業化中具有廣闊的應用前景和顯著的經濟效應，對保證農產品質量安全，維護生態環境建設，促進畜牧業生產發展具有重要意義。

附圖說明